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60% O_2对新生大鼠肺Bcl-2类基因表达的影响

作　者: 王安茹
导　师: 罗小平
学　校: 华中科技大学
专　业: 儿科
关键词: 高氧支气管肺发育不良细胞凋亡基因,Bax 基因,Bcl-XL
分类号: R722.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

目的高氧所致的肺损伤是发生支气管肺发育不良的主要因素之一。最近的研究发现,II, III和IV期支气管肺发育不良患儿的支气管和肺泡上皮细胞凋亡率增加。动物实验也证实高浓度高氧暴露的新生肺组织细胞凋亡率增加,但分子机制不清。中浓度氧高氧暴露与细胞凋亡的关系未有报道。本实验室前期实验证实95%O2暴露导致p53和p21WAF/CIP1基因表达一过性增加,其中p53诱导p21WAF/CIP1表达增加,后者导致细胞周期停滞,同时p53也促进细胞凋亡。另有动物试验发现在高氧暴露时Bcl-2家族发生改变。已知在细胞凋亡的内源性通路中,定位于线粒体外膜的Bax通过寡聚化形成孔道,促进细胞色素c等促凋亡分子释放。而Bcl-XL则可抑制Bax的活化。本研究建立中浓度高氧暴露(60%O2)的新生大鼠支气管肺发育不良模型,并探讨细胞凋亡相关基因Bax和Bcl-XL表达改变及与氧暴露的时相关系。方法新生足月Spraque-Dawley大鼠随机分为实验组和对照组,每组8只,制备60%O2致新生鼠支气管肺发育不良模型。苏木素-伊红染色观察生后1 d、4 d、7 d、11 d、14 d肺组织病理改变,应用HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文报告分析系统计算平均肺泡面积和单位面积肺泡数。免疫组织化学染色技术检测Bax及Bcl-XL基因蛋白的表达,以平均吸光度评估肺组织蛋白表达强度。逆转录-聚合酶链式反应技术检测Bax和Bcl-XL基因mRNA表达,聚合酶链式反应产物经2.5%琼脂糖凝胶电泳后,利用凝胶成像分析系统计算目的基因条带/内参照基因条带平均吸光度比值作为目的基因相对mRNA表达水平。所有结果以均值±标准差表示。采用SPSS12.0统计软件包分析,各组之间比较采用单因素方差分析,两两之间比较用q检验。结果P<0.05为显著性检验标准。结果生后1 d～14 d的空气组新生大鼠肺泡结构逐渐发育成熟,平均肺泡面积变小,单位面积肺泡数增多。与空气组比较,高氧组自4 d开始出现肺泡发育障碍,单位面积肺泡数减少,平均肺泡面积增大。病变至14 d最为明显,肺泡结构简单化,肺组织炎性细胞浸润。基因表达方面,高氧组与空气组比较,Bax基因表达于生后1 d开始增加,其mRNA水平于生后11 d开始降低(q=8.4802, P<0.05),蛋白表达于生后14 d降低(q=6.8364, P<0.05); Bcl-XL基因mRNA水平于生后1 d至14 d表达增加,其蛋白表达在第1 d较低(q=10.4299, P<0.05),随后增加。差异有显著意义。Bax和Bcl-XL蛋白主要分布在肺支气管上皮细胞。随着氧暴露时间延长,高氧组Bax的mRNA及蛋白和Bcl-XL的mRNA水平均呈降低趋势,而Bcl-XL蛋白表达呈上升趋势。空气组的Bax mRNA水平从11 d开始增加,蛋白水平从14 d开始增加。空气组Bcl-XL mRNA和蛋白水平均在第1 d表达最丰。结论中浓度高氧暴露模型与支气管肺发育不良患儿的肺部病理改变相似,细胞凋亡可能参与了高氧诱导的肺损伤。高氧暴露诱导新生大鼠肺细胞凋亡的调节可能和Bax/Bcl-XL基因表达异常有关。在高氧暴露早期,促凋亡蛋白Bax表达增加,肺细胞凋亡增加,因凋亡而减少的肺上皮细胞和血管内皮细胞阻碍了正常的肺发育。随着氧暴露时间的延长,Bax的表达降低,抗凋亡蛋白Bcl-XL表达增加,抑制Bax的促凋亡作用,肺细胞凋亡减少,开始肺组织修复过程,新生鼠对高氧形成耐受。本文亦通过细胞凋亡基因表达随着暴露时间的变化趋势间接揭示了细胞凋亡和氧暴露的时相关系,即高氧暴露诱导的细胞凋亡并非持续高水平,早期时肺细胞凋亡效应显著,后期则减弱。

全文目录

正文  5-36
  中文摘要  5-7
  英文摘要  7-9
  前言  9-11
  材料和方法  11-19
  结果  19-29
  讨论  29-34
  参考文献  34-36
综述  36-55
  细胞凋亡与高氧性肺损伤  36-46
  CD200 分子及其受体的研究进展  46-55
附录  55-56
致谢  56

60% O_2对新生大鼠肺Bcl-2类基因表达的影响

内容摘要

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