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烟草根围土壤拮抗细菌的筛选及控病研究

作　者: 王丽珍
导　师: 肖崇刚
学　校: 西南大学
专　业: 植物病理学
关键词: 芽孢杆菌荧光假单胞杆菌烟草赤星病菌烟草黑胫病菌烟草青枯病菌
分类号: S435.72
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

烟草是叶用经济作物，对烟叶的品质和安全性要求较高。根据烟草病害发生的普遍性及所造成的经济损失来衡量，烟草赤星病(Alternaria alternata)、烟草黑胫病(Phytophthora parasiaca)和烟草青枯病(Ralstonia solanacearum)是烟草上除烟草病毒病以外发生最普遍、危害最严重的侵染性病害。在烟草病害的多种防治方法中，生物防治对烟叶生产的可持续发展具有较好的应用前景。芽孢杆菌(Bacillus spp.)具有显著的生防潜力，是病害生防微生物的重要组成部分。荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescent)广泛存在于土壤中，其多数株系具有防治植物病害和促进植物生长的双重功效。本研究从重庆不同地县烟区的烟草根围土壤中分别筛选对上述三种病害有生防潜力的拮抗菌，并对其进行初步鉴定。1、从重庆石柱、黔江、奉节等地县烟区共采集到烟草根围土样85份。采用土壤悬浮液高温处理分离法获得了芽孢菌499株，采用在KMB培养基上土壤稀释分离法获得了荧光菌253株，两种分离方法共获得细菌752株。2、对烟草赤星病菌和烟草黑胫病菌采用对峙培养法、对烟草青枯病菌采用平板喷雾法初筛到有拮抗活性的菌株348个，占分离株总数的46.3％。复筛结果表明：对赤星菌抑菌带宽在8.0～12.0mm的拮抗菌株有29株，其中芽孢菌12株，荧光菌17株；对黑胫菌抑菌带宽在9.0～14.0mm的拮抗菌株有26株，其中芽孢菌2株，荧光菌24株；对青枯菌抑菌圈直径在30.0～42.0mm．的拮抗菌株有31株，其中芽孢菌9株，荧光菌22株。3、温室控病结果表明：对烟草赤星病的防治效果为31.31％～87.51％，其中菌株P-72-10的防治效果最好，防效在80.00％以上的菌株有4个。对烟草黑胫病的防治效果为30.44％～73.91％，其中菌株P-71-2防治效果最好，防效在70.00％以上的菌株有2个；对烟草青枯病的防治效果为46.00％～86.00％，其中菌株P-76-2的防治效果最好，防效在80.00％以上的菌株有5个。4、在平板抑菌和温室控病的基础上，结合拮抗菌生长的情况及菌株间没有拮抗性的要求，筛选出芽孢菌B-43-6和荧光菌P-72-10组合，二者的发酵菌悬液按不同比例混合抑制烟草赤星病(菌)，平板拮抗和温室防效的最佳比例均是4∶1，平板抑菌带宽为7.6mm，温室防效为91.83％；芽孢菌B-57-4和荧光菌P-70-3组合，二者的发酵菌悬液按不同比例混合抑制烟草青枯病(菌)，平板拮抗和温室防效的最佳比例均是3∶1，平板抑菌带宽为5.1mm，温室防效为92.0％。5、对平板抑菌和温室控病筛选出的10株菌进行抗菌谱测定，结果表明：这10株菌具有较广的抗菌谱，特别是对玉米小斑病菌、小麦赤霉病菌和烟草根黑腐病菌等具有较强的抑制作用。6、对抗菌谱测定中的10株菌进行了分类地位的初步鉴定，通过形态观察和生理生化测定，初步认为：5株荧光菌P-3-1、P-69-6、P-70-3、P-71-2、P-72-10均为荧光假单胞杆菌；5株芽孢菌B-16-4、B-43-6、B-46-2、B-57-4、B-61-10中，B-16-4、B-61-10为枯草芽孢杆菌，B-43-6、B-46-2、B-57-4为巨大芽孢杆菌。

全文目录

摘要  7-9
Abstract  9-11
第一章文献综述  11-23
第二章引言  23-25
第三章材料与方法  25-37
  1 供试材料  25-29
    1.1 拮抗菌分离材料  25
    1.2 供试病原菌  25
    1.3 烟草品种  25
    1.4 培养基  25-27
    1.5 主要仪器  27
    1.6 主要化学试剂  27-29
  2 试验方法  29-37
    2.1 土样的采集  29
    2.2 细菌的分离  29
    2.3 拮抗菌的筛选  29-30
    2.4 温室控病  30-32
    2.5 抗菌谱测定  32
    2.6 细菌鉴定  32-37
第四章结果与分析  37-51
  1 分离结果  37-38
  2 拮抗细菌平板筛选  38-42
    2.1 初筛  38
    2.2 复筛  38-42
  3 温室控病试验  42-47
    3.1 单个菌株对烟草赤星病的温室防效  42-43
    3.2 单个菌株对烟草黑胫病的温室防效  43-44
    3.3 单个菌株对烟草青枯病的温室防效  44-46
    3.4 两个菌株发酵菌悬液不同比例混合对烟草赤星病的温室防效  46
    3.5 两个菌株发酵菌悬液不同比例混合对烟草青枯病的温室防效  46-47
  4 抗菌谱测定  47-48
  5 细菌鉴定  48-51
第五章结论与讨论  51-55
  1 土壤细菌的分离  51
  2 拮抗菌的筛选  51-52
  3 温室控病  52-53
    3.1 单个菌株温室控病  52
    3.2 两个菌株发酵菌悬液不同比例混合温室控病  52-53
  4 抗菌谱测定  53
  5 细菌鉴定  53-54
  6 试验中的不足之处及有待深入的地方  54-55
结语  55-57
参考文献  57-63
附图  63-69
致谢  69-71
硕士期间发表的论文  71

烟草根围土壤拮抗细菌的筛选及控病研究

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