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龙眼体细胞胚胎成熟机理的研究

作　者: 李冬梅
导　师: 赖钟雄；潘东明
学　校: 福建农林大学
专　业: 果树学
关键词: 龙眼体胚发生成熟组织形态学生理生化
分类号: S667
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

本研究以龙眼“红核子”、“十二月龙眼”等品种胚性愈伤组织诱导出的小子叶形体胚为材料，采用石蜡切片、蛋白质电泳、可溶性糖和淀粉含量测定等手段，研究了光照条件、蔗糖浓度、PEG、ABA、椰乳等因素对龙眼体胚成熟的影响，以探讨龙眼体胚成熟机理。主要研究结果如下：一、比较了光照、蔗糖浓度、PEG、ABA、椰乳等因素对龙眼体胚成熟的影响。黑暗和高浓度蔗糖(5％)有利于龙眼体胚的成熟，经过75d的“成熟培养”，体胚增大明显，白色，结实；椰乳对龙眼体胚成熟有利；光照、低糖、PEG、ABA均不利于龙眼体胚的成熟。二、龙眼体胚经历黑暗和高浓度蔗糖(5％)的正常成熟过程，其体胚在细胞形态学上有共性，在体胚成熟过程中可见到明显的子叶和胚芽原基形成，生长点的细胞排列紧密，染色较深，富含淀粉粒；光照、低糖、PEG、ABA条件下成熟的体胚即使在成熟初期阶段能观察到子叶和芽原基，但到成熟后期时子叶断裂，胚芽原基消失，且细胞结构松散，染色较深的细胞较少。三、龙眼体胚成熟过程和每个成熟阶段都可检测到特异蛋白质。在黑暗低糖和ABA同时作用下，龙眼体胚成熟过程中蛋白质合成最活跃，可检测到的蛋白质组分最多，蛋白质分子量变化范围最大，且大部分都在10～30KD之间；PEG作用下体胚成熟过程中蛋白质合成受阻，可检测到的蛋白质组分最少。四、在高浓度蔗糖(5％)的作用下，龙眼体胚成熟过程各阶段总糖、果糖、蔗糖含量变化呈双峰型，而没有高糖作用的体胚成熟过程中可溶性糖含量的变化呈单峰型。龙眼体胚经过正常成熟后能够高频率萌发似乎与其可溶性总糖、蔗糖积累有关。五、在光照低糖、光照高糖、黑暗低糖和PEG的作用下，龙眼体胚成熟过程中淀粉含量变化相似，整个成熟过程中淀粉含量变化呈单峰型；黑暗低糖、黑暗低糖和ABA、黑暗高糖和ABA、黑暗高糖和椰乳的作用下，龙眼体胚成熟过程中淀粉含量变化呈双峰型。而在黑暗和高浓度蔗糖(5％)作用下经历正常成熟的体胚，3个供试材料中淀粉含量变化也很相似，淀粉含量总的趋势都是上升。

全文目录

缩写词  8-9
中文摘要  9-10
英文摘要  10-12
第一章绪论  12-24
  1 植物体细胞胚胎成熟的研究进展  12-22
    1.1 影响植物体细胞胚胎成熟的因素  12-17
      1.1.1 基因型  13
      1.1.2 糖类  13-14
      1.1.3 ABA  14-15
      1.1.4 PEG  15-16
      1.1.5 其它因子  16-17
    1.2 植物体细胞胚胎成熟过程中的组织形态学变化  17-18
    1.3 植物体细胞胚胎成熟过程中的生理生化变化  18-22
      1.3.1 体细胞胚胎成熟过程中的蛋白质代谢动态  18-20
      1.3.2 植物体细胞胚胎成熟过程中的可溶性糖变化  20
      1.3.3 植物体细胞胚胎成熟过程中的淀粉变化  20-22
  2 龙眼体细胞胚胎发生机理的研究进展  22-24
第二章龙眼体胚的成熟培养  24-29
  1 材料与方法  24-25
    1.1 材料  24
    1.2 方法  24-25
      1.2.1 龙眼小子叶形体胚的诱导  24
      1.2.2 龙眼体胚的成熟培养  24
      1.2.3 龙眼体胚成熟过程观察  24-25
  2 结果与分析  25-29
    2.1 龙眼小子叶形体胚的诱导  25
    2.2 不同因素对龙眼体胚成熟的影响  25-29
      2.2.1 光照  25
      2.2.2 蔗糖浓度  25-26
      2.2.3 聚乙二醇  26
      2.2.4 脱落酸  26-27
      2.2.5 椰乳  27
      2.2.6 基因型  27-29
第三章龙眼体胚成熟过程中的组织细胞学观察  29-32
  1 材料与方法  29-30
    1.1 供试材料  29
    1.2 材料处理方法  29
    1.3 石蜡切片制作方法  29-30
  2 结果与分析  30-32
    2.1 光照、低糖、ABA、PEG作用下体胚成熟过程中的细胞形态学观察  30
    2.2 黑暗高糖加椰乳作用下体胚成熟过程中的细胞形态学观察  30-31
    2.3 不同基因型体胚在黑暗高糖条件下成熟过程中的细胞形态学观察  31-32
第四章龙眼体胚成熟过程中的特异蛋白质变化  32-61
  1 材料和方法  32-36
    1.1 材料  32
    1.2 方法  32-36
      1.2.1 材料处理方法  32
      1.2.2 蛋白质提取方法  32-33
      1.2.3 丙烯酰胺凝胶制作  33-34
      1.2.4 蛋白质上样量的比较  34
      1.2.5 电泳  34-35
      1.2.6 染色  35-36
  2 结果与分析  36-61
    2.1 龙眼体胚蛋白质电泳体系的优化  36
      2.1.1 蛋白质提取方法  36
      2.1.2 蛋白质凝胶  36
      2.1.3 蛋白质上样量  36
      2.1.4 染色方法  36
    2.2 不同成熟处理龙眼体胚成熟过程中的蛋白质变化  36-53
      2.2.1 光照低糖下体胚成熟过程中蛋白质组分变化  36-37
      2.2.2 光照高糖下体胚成熟过程中蛋白质组分变化  37-40
      2.2.3 黑暗低糖下体胚成熟过程中蛋白质组分变化  40-42
      2.2.4 黑暗低糖加PEG下体胚成熟过程中蛋白质组分变化  42-44
      2.2.5 黑暗低糖加ABA下体胚成熟过程中蛋白质组分变化  44-47
      2.2.6 黑暗高糖下体胚成熟过程中蛋白质组分变化  47-49
      2.2.7 黑暗高糖加ABA下体胚成熟过程中蛋白质组分变化  49-51
      2.2.8 黑暗高糖加椰乳下体胚成熟过程中蛋白质组分变化  51-53
    2.3 不同基因型体胚成熟过程中的蛋白质变化差异  53-61
      2.3.1 “红核子Ⅰ”体胚成熟过程中蛋白质组分变化  53
      2.3.2 “红核子Ⅱ”体胚成熟过程中蛋白质组分变化  53-56
      2.3.3 “十二月龙眼”体胚成熟过程中蛋白质组分变化  56-61
第五章龙眼体胚成熟过程中可溶性糖含量的变化  61-72
  1 材料和方法  61-62
    1.1 材料  61
    1.2 方法  61-62
      1.2.1 体胚成熟处理  61
      1.2.2 可溶性糖的提取  61
      1.2.3 可溶性糖含量的测定  61
      1.2.4 可溶性糖含量的计算  61
      1.2.5 标准曲线绘制  61-62
  2 结果  62-72
    2.1 标准曲线  62-63
      2.1.1 可溶性总糖标准曲线  62
      2.1.2 果糖标准曲线  62-63
      2.1.3 蔗糖标准曲线  63
    2.2 体胚成熟过程中可溶性糖含量的变化  63-67
      2.2.1 体胚成熟过程中可溶性总糖含量的变化  63-65
      2.2.2 体胚成熟过程中果糖含量的变化  65-66
      2.2.3 体胚成熟过程中蔗糖含量的变化  66-67
    2.3 龙眼不同基因型体胚成熟过程中可溶性糖含量变化  67-72
      2.3.1 总糖含量的变化  67-68
      2.3.2 果糖含量的变化  68-69
      2.3.3 蔗糖含量的变化  69-72
第六章龙眼体胚成熟过程中淀粉含量变化  72-77
  1 材料和方法  72-73
    1.1 材料  72
    1.2 方法  72-73
      1.2.1 材料处理  72
      1.2.2 药品配制  72
      1.2.3 淀粉的提取  72
      1.2.4 淀粉含量测定  72
      1.2.5 样品中淀粉含量的计算  72-73
  2 结果与分析  73-77
    2.1 体胚成熟过程中淀粉含量的变化  73-74
    2.2 不同基因型体胚成熟过程中淀粉含量的变化  74-77
第七章讨论  77-82
  1 龙眼体胚成熟机理的探讨  77-78
  2 体胚成熟过程中的特异蛋白质变化  78-80
    2.1 基因型影响体胚成熟过程蛋白质代谢  78-79
    2.2 光照与龙眼体胚成熟过程中蛋白质代谢的关系  79
    2.3 PEG与龙眼体胚成熟过程中蛋白质代谢的关系  79
    2.4 ABA与龙眼体胚成熟过程中蛋白质代谢的关系  79-80
    2.5 椰乳与龙眼体胚成熟过程中蛋白质代谢的关系  80
  3 PEG在龙眼体胚成熟调控中的作用  80-81
  4 龙眼胚胎后期发育调控与遗传改良  81-82
参考文献  82-93
附录一培养基配方  93-94
附录二图版及图版说明  94-120
致谢  120

龙眼体细胞胚胎成熟机理的研究

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