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甲醛气道刺激作用生物靶分子的研究

作　者: 陈茂林
导　师: 杨旭
学　校: 华中师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 刺激作用靶分子克隆辣椒素受体气道神经源性炎症甲醛 capsaicin 不良建筑物综合征蛋白质受体分子药理学分子机理
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
下　载: 31次
引　用: 1次
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内容摘要

作为室内空气主要污染物之一，甲醛的危害是多方面的，其中之一就是气道刺激作用或称气道神经源性炎症，可以导致不良建筑物综合征（sick building syndrome,SBS）、多重化学敏感症（multiple chemical sensitivitv,MCS）等。由于室内装修的日益流行，甲醛的危害性越来越突出，已受到人们的普遍重视。甲醛刺激作用的触发性生物靶分子到底是什么?目前还不十分清楚。因此气道刺激作用的分子机理还有待阐明，不过有一些假设倒是引起了我们的注意，如Nielsen假设就是一个比较重要的、正日益受到人们重视的理论假设，它从分子机理上解释了甲醛等空气污染物是如何通过辣椒素受体的介导引起气道刺激作用和气道神经源性炎症的。但是它还只是一个假设，还需要我们做一些工作来证明它是否正确。在Nielsen假设中有一个很重要的环节，就是甲醛作为配子体对辣椒素受体的激活，但在Dr.Nielsen提出假设时辣椒素受体还没有克隆出来，对此假设的研究自然不够方便。1997年辣椒素受体的克隆给Nielsen假设的研究带来生机，而美国加州大学旧金山分院细胞与分子药理学研究所D.J.Julius博士（克隆辣椒素受体发明人）赠送的VR1（Ⅰ型辣椒素受体）-cDNA使我们的研究工作得以开展。这项实验中，我们首先将大白鼠VR1-cDNA质粒转入大肠杆菌中进行扩增，然后提取质粒并酶切，然后在体外转录成VR1-mRNA，接着将VR1-mRNA注射到非洲爪蟾卵母细胞中表达为蛋白质受体，建立了实验模型细胞，最后用双微电极电压钳检测此模型细胞。当我们用辣椒素（capsaicin）（10⁵M）刺激模型细胞时，细胞出现了电流变化，而加入capsazepine（10⁵M）（Ⅰ型辣椒素受体特异性抑制剂）和capsaicin(10^?M)（辣椒素）时，模型细胞没有反应（n=3），可以认为我们的模型细胞已经成功地建立起来了。然后我们用一系列浓度的甲醛刺激模型细胞，发现甲醛确实可以激活辣椒素受体，并且在甲醛浓度与辣椒素受体的反应大小之间还可能存在量效关系。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-7
前言  7-9
一. 类香草素受体的结构和功能  9-19
二. 实验内容  19-37
  (一) 香草素受体cDNA质粒的转化和扩增  19-22
  (二) 香草素受体cDNA的体外转录  22-25
    1 体外转录  22-24
    2 香草素受体mRNA的电泳检测  24-25
  (三) 模型细胞的重建及检测  25-37
    1 概述  25-36
      1.1 非洲爪蟾卵母细胞的处理方法  25-31
      1.2 双微电极电压钳原理和方法  31-34
      1.3 模型细胞的重组  34-36
    2 实验过程  36-37
三结果及讨论  37-43
  (一) VRI-cDNA pcDNA3的扩增与鉴定  37-40
  (二) 体外转录产物的制备与鉴定  40-41
  (三) 卵母细胞电压钳实验  41-43
  (四) 实验的不足之处及下一步打算  43
四. 结论  43-44
参考文献  44-46
所发论文  46-47
致谢  47

甲醛气道刺激作用生物靶分子的研究

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