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胃癌特异性血管结合多肽的体内筛选和初步鉴定

作　者: 王瑜
导　师: 吴开春
学　校: 中国人民解放军第四军医大学
专　业: 内科学
关键词: 噬菌体体内筛选内皮细胞胃癌肾包膜下移植法
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

实体瘤新生血管和正常组织血管内皮在分子水平不同。针对差异表达分子进行肿瘤血管的靶向治疗是有良好前景的治疗方法，因此筛选肿瘤血管特异表达分子的配体片段具有十分重要的意义。噬菌体随机肽库体内筛选技术是在不清楚受体分子的情况下，以受体的天然存在环境——组织器官为筛选配基，寻找未知靶分子，确定其结构域。此方法在筛选血管特异表达的配体和受体方面所具有的优势正日益受到重视。本研究应用噬菌体随机肽文库筛选技术，体内淘筛与胃癌移植瘤模型血管内皮结合的多肽片段，并检测筛选所得噬菌体克隆与移植瘤组织及对照组织(脑、肺、心脏)的结合数量，旨在获得与胃癌移植瘤血管内皮特异结合的短肽，为肿瘤血管抑制治疗提供有效的方法。本研究对环磷酰胺(cyclophosphamide，CTX)免疫抑制小鼠行肾包膜下移植法(subrenal capsular assay，SRCA)，把手术切除新鲜人胃癌组织植入肾包膜下，以制备鼠肾包膜下移植瘤模型用于体内筛选。移植后第7d，肿瘤组织体积明显增大，组织学可见肾包膜下恶性细胞大量增殖及血管形成。本研究在小鼠体内对噬菌体十二肽库进行了四轮淘筛，回收移植瘤和对照组织(脑)中的噬菌体，滴定每轮噬菌体产出的滴度。同时免疫组织第四军医大学硕士学位论文化学检测噬菌体在移植瘤组织的分布情况。结果显示与胃癌移植瘤血管特异结合的噬菌体得到了富集，是对照组织（脑）的3．4倍。免疫组织化学结果显示噬菌体注入小鼠尾静脉 5 min后，定位于移植瘤血管内皮。第四轮淘筛后，噬菌体未经扩增，随机挑取5个单克隆，经DNA测序后推导出呈现随机肽的氨基酸序列，十二肽YESIAIGVAPSQ出现次数最高。向小鼠体内单独注入呈现十二肽YESIRIGVAPSQ的噬菌体，从移植瘤和对照组织（脑、肺、心脏）分别回收噬菌体，滴定计数。结果移植瘤组织回收的噬菌体数量分别是脑的4．2倍，肺的4．9倍，心脏的5．4倍。因此，体内淘筛到的短肽YESIRIGVAPSQ在移植瘤组织有特异性的汇聚，有可能成为肿瘤血管靶向治疗的有效工具。体内淘筛噬菌体随机肽库，筛选与肿瘤血管内皮细胞特异结合的短肽是可行的，具有推广和应用的价值。

全文目录

缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-11
实验材料及仪器设备  11-13
实验方法  13-19
实验结果  19-25
讨论  25-30
小结  30-31
文献回顾  31-51
  第一部分肿瘤血管研究进展  31-40
  第二部分噬菌体表面呈现技术及应用  40-51
参考文献  51-59
致谢  59

胃癌特异性血管结合多肽的体内筛选和初步鉴定

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