学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

人支气管上皮细胞癌变株多种抑癌基因启动子的异常甲基化研究

作　者: 李鹏
导　师: 高德伟
学　校: 中国人民解放军军医进修学院
专　业: 呼吸内科
关键词: 人支气管上皮细胞 α-粒子细胞癌变 DNA甲基化
分类号: R734.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
下　载: 32次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

肺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，在我国肺癌的死亡率还在呈现上升趋势。目前已确定在人类多种恶性肿瘤中，部分肿瘤抑制基因转录失活是与DNA甲基化密切相关。因此，异常甲基化就成为继基因缺失和突变之后，引起肿瘤抑制基因功能失活的另一重要途径。为了深入探讨人类肺癌发病的相关机理，并为以后的临床应用提供相应依据，我们在军事医学科学院二所四室建立的α-粒子照射诱发人支气管上皮细胞BEP2D癌变细胞克隆实验模型的基础上，研究了癌变细胞中部分与细胞增殖、凋亡、有丝分裂检测点及DNA修复相关的基因启动子区CpG岛的甲基化情况，并进一步分析了与细胞周期密切相关基因的mRNA转录水平。本实验应用甲基化特异性的PCR（MSP）方法研究了与细胞周期调节有关的p16^INK4a、p14^ARF，与DNA修复有关的MGMT，解毒基因GSTP1，与有丝分裂检测点相关的基因BUB3和与细胞凋亡相关的DAPK基因5’启动子区CpG岛的甲基化情况，并用RT-PCR检测了p14^ARF基因转录水平。结果发现p14^ARF基因5’启动子区CpG岛在BEP2D细胞中没有甲基化，但在其癌变细胞BERP35T1中发生了甲基化，为进一步探讨5’启动子区CpG岛甲基化对基因转录的影响，我们采用丫卜汲徽’fF)t训【I论义小义纵出 RT PCR万法扩增…4肌’”基因的郡分外显子，并对其表达进行半定量分析，结果与我们设想的吻合，出现了 pl4M’基因的转录水平显著下降；而与pl4朋”基因共用 2个外显子的… 毗的基因在两种细胞的5’后动子区印G岛都未发生甲基化；MGMT基因在BEPZD 细胞和癌变细胞sERP3sTI中s’启动子区QG岛都发生了甲基｛乙； DAPK基因在BEPZD 细包中5’启动子区印G岛已有部分甲基化，在BEop35TI细胞中冗全甲基化；GSTPI基因在BEPZD细胞中未出现甲基化，在BERP35TI 细胞中发生了邢分甲基化；Bm3基因在BEPZD 和BERP35TI 细包中均未发生甲基化。为了证明本实验方法的可靠性，我fl1对经盯R扩增的 BUB3基因进行回收，并转染到细菌中克隆，进行测序，显示扩增的碱基序列中全部C均转变成T，即未发生甲基化，从而证实我们的实验操作是可靠的。我们的实验发现，在辐射诱发人支气管上皮细胞恶性转化中，部分与细胞增殖、DNA修复和细胞凋亡相关的功能基因在5’启动子区CpG岛上发生了甲基化，并由止匕抑制了基因的转录。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-12
材料与方法  12-20
  一、主要试剂和仪器  12-13
  二、方法  13-20
    1 、细胞培养  13
    2 、细胞DNA的提取  13-14
    3 、细胞RNA的提取  14
    4 、 SssI甲基酶修饰对照DNA  14
    5 、甲基化特异PCR(MSP)  14-16
    6 、 BUB3基因的PCR产物的克隆和测序  16-18
    7 、 P14~(ARF)基因的RT-PCR  18-20
结果  20-27
  一、经SssI甲基酶处理的正常组织DNA的MSP分析  20
  二、 GSTP1，DAPK，MGMT，p14~(ARF)，p16~(INK4a)和BUB3，基因在BEP2D和癌变BERP35T1细胞系中的甲基化检测  20-24
  三、亚硫酸盐修饰BERP35T1基因组后BUB3基因启动子区非甲基化扩增产物的序列分析  24-25
  四、 P14~(ARF)在BEP2D和癌变细胞BERP35T1、BERP35T4中的表达分析  25-27
讨论  27-42
  一、 CpG岛和DNA甲基化概述  27-29
  二、我们研究的几种肿瘤抑制基因  29-34
  三、 CpG岛甲基化对肿瘤抑制基因的影响  34-36
  四、甲基特异性PCR(MSP)技术的应用  36-41
  五、总结  41-42
结论  42-43
参考文献  43-51
综述 ARF-INK4A的另一个重要成员  51-63
致谢  63

人支气管上皮细胞癌变株多种抑癌基因启动子的异常甲基化研究

内容摘要

全文目录

相似论文