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缝隙连接蛋白connexin26及connexin30在拟老化大鼠内耳中的表达及调控

作　者: 申玲
导　师: 孔维佳
学　校: 华中科技大学
专　业: 耳鼻咽喉科学
关键词: connexin26 线粒体DNA 甲基化老年性聋 connexin30 实时定量PCR
分类号: R764.43
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

【目的】探讨connexin26基因启动子区异常甲基化与老年性聋的关系。【方法】D-半乳糖诱导拟老化大鼠模型建立,听性脑干反应(ABR)检测大鼠用药前后听阈,实时定量PCR技术检测线粒体DNA4834bp缺失突变率;实时定量RT-PCR,免疫印迹Western Blot测定用药后Cx26的mRNA和蛋白表达水平;软件分析GJB2基因(编码Cx26蛋白)启动子区;BSP法结合基因测序法检测GJB2基因启动子区甲基化程度;相关分析比较GJB2基因启动子区甲基化程度与Cx26mRNA、蛋白表达水平以及不同剂量组的关系。【结果】线粒体DNA4834bp缺失突变率随D-半乳糖剂量增大而增加,四组之间ABR阈移差异无统计学意义(P>0.05);A、B、C、D四组Cx26mRNA表达水平各组差异无统计学意义(P>0.05);Cx26蛋白表达水平D组较A、B组均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),其余各组间比较差异无统计学意义(P>0.05);Methyl Primer Express软件显示GJB2基因启动子区富含CpG岛;BSP结合基因测序法显示高剂量组内耳组织中GJB2基因启动子区呈高甲基化;GJB2基因甲基化程度与Cx26mRNA、蛋白表达有相关性。【结论】在拟老化大鼠内耳组织中存在GJB2基因启动子区高甲基化与其低表达相关,推测GJB2基因衰老性甲基化可能参与老年性聋的发生发展。【目的】研究缝隙连接蛋白connexin30在D-半乳糖诱导的拟老化大鼠内耳中的表达。【方法】D-半乳糖诱导拟老化大鼠模型建立,听性脑干反应(ABR)检测大鼠用药前后听阈,实时定量PCR技术检测线粒体DNA4834bp缺失突变率;实时定量RT-PCR测定各组用药后Cx30 mRNA的表达水平;免疫印迹Western Blot测定各组用药后Cx30蛋白的表达水平。【结果】线粒体DNA4834bp缺失突变率随D-半乳糖剂量增大而增加,四组之间ABR阈移差异无统计学意义(P>0.05);Cx30mRNA表达水平各组差异无统计学意义(P>0.05);Cx30蛋白表达水平B组较A组、D组显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),其余各组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】Cx30蛋白表达水平在拟老化大鼠内耳组织中存在不同程度的代偿性升高,推测connexin30可能参与老年性聋的发生发展。

全文目录

英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-13
  参考文献  12-13
第一部分缝隙连接蛋白connexin26 基因启动子区异常甲基化与老年性聋关系研究  13-35
  材料和方法  14-24
  结果  24-31
  讨论  31-33
  参考文献  33-35
第二部分缝隙连接蛋白connexin30 在 D-半乳糖诱导的拟老化大鼠内耳中的表达  35-48
  材料和方法  35-41
  结果  41-44
  讨论  44-46
  参考文献  46-48
综述  48-64
  参考文献  57-64
致谢  64-65

缝隙连接蛋白connexin26及connexin30在拟老化大鼠内耳中的表达及调控

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