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复方地黄汤防治转基因早老性痴呆小鼠（SAM-P/8）的实验研究

作　者: 侯魁元
导　师: 孙丽慧
学　校: 黑龙江中医药大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 复方地黄 SAM-P/8小鼠 Bcl-2、Bax 凋亡细胞神经元保护
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:老年性痴呆(以阿尔茨海默病AD为主)是老年人常见病,多发病。对于老年性痴呆的治疗,目前国内外尚无特效方法和药物。祖国传统医学对老年性痴呆的病因、病机有其独特的认识,并在长期的临床实践中积累了丰富的治疗经验。中医学认为老年痴呆归属于中医学呆症、文痴、善忘、语言颠倒、狂证、郁证等病症。我们以“益肾健脾、祛痰清瘀”为基本治则,复方地黄有滋补肾阴,补脾益气,清除痰瘀,充脑安神的作用,同时中药复方方剂包括多味中药,单味药又含多种成分,单独或相互作用于多个靶位,本研究将复方地黄应用于SAM-P/8小鼠,观察其行为学改变;应用光镜HE染色法和电镜观察各组小鼠海马神经元变化情况;用免疫组化方法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达情况;应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,进一步观察复方地黄对老年痴呆的疗效和作用机理,为临床用药提供理论指导;为进一步阐述老年痴呆的病机病理提供实验基础。方法:将实验SAM-P/8小鼠随机分为三组:复方地黄组,西药组,模型组,每组15只,复方地黄组给予复方地黄混悬液1ml/天灌胃(分次给药),西药组给予脑复康水溶液1ml/只灌胃(75片/300ml纯净水),正常对照组采用健康昆明种小鼠,和模型组用生理盐水1ml/天灌胃,3周后,各组小鼠进行Morris水迷宫行为学测试,处死后用光镜和电镜观察海马区神经元形态的改变,应用免疫组化法检测海马Bcl-2、Bax蛋白的表达情况,及流式细胞仪观察凋亡细胞的变化,将所得数据进行统计分析。结果:1.经Morris水迷宫测试,复方地黄组SAM-P/8小鼠逃避潜伏期29.50±2.86,比模型组逃避潜伏期38.64±3.86缩短,复方地黄组SAM-P/8小鼠在原平台停留时间38.48±3.26,比模型组在原平台停留时间29.81±5.16延长,有显著性差异(p<0.05),与西药组相比无显著差异(p>0.05)。2.形态学观察表明复方地黄组海马和额叶皮质的神经元与模型组比较排列规则紧密,结构完整,数量多,胶质细胞较少,超微结构改变亦较模型组轻微,趋向于正常组结构。3.免疫组化结果,地黄组Bcl-2积分光密度值IOD 16.64±2.27,Bax值0.16±0.014;与模型组Bcl-2积分光密度值IOD 5.15±0.99,Bax为0.25±0.028相比,有显著差异(p<0.05),与西药组Bcl-2积分光密度值IOD 16.96±2.83,Bax为0.18±0.019相比无显著差异(p>0.05)。4.流式细胞仪凋亡细胞分析结果:正常组中凋亡率为3.19±0.12,模型组细胞凋亡率却达到16.28±2.22,而复方地黄组中细胞凋亡率少到10.96±1.84,与模型组和正常组比较有显著差异(p<0.05)。结论:复方地黄能够提高早老性痴呆小鼠的学习记忆能力,减轻脑组织形态学损伤,增强脑组织神经元的保护作用,同时能通过上调抗凋亡基因Bcl-2,减少促凋亡基因Bax的表达来降低神经元的凋亡数量,对SAM-P/8痴呆小鼠大脑神经元具有较好的保护和治疗作用。

全文目录

缩略语表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
引言  11-13
文献综述  13-34
  1 老年痴呆的历史回顾  13
  2 现代医学对老年痴呆的认识和研究  13-27
    2.1 老年痴呆的流行病学  13-14
    2.2 老年痴呆的诱发因素  14-15
    2.3 老年痴呆的发病机制  15-20
    2.4 老年痴呆的造模常见方法  20-24
    2.5 老年性痴呆的治疗现状  24-27
  3 祖国医学对老年性痴呆的认识及治疗概况  27-34
    3.1 历代文献对老年痴呆相关记载与描述  27-28
    3.2 中医学对老年痴呆病因病机的认识  28-30
    3.3 本研究对老年性痴呆的认识及方解  30-34
实验研究  34-44
  1 实验材料  34-35
    1.1 实验动物  34
    1.2 主要仪器  34
    1.3 主要试剂及配制  34-35
  2 实验方法  35-38
    2.1 水迷宫行为学实验  36
    2.2 光学显微镜及免疫组化实验  36-37
    2.3 电镜标本制作  37-38
    2.4 流式细胞仪检测  38
  3 统计处理  38
  4 实验结果  38-44
    4.1 复方地黄对各组小鼠学习记忆能力的影响  38-40
    4.2 光镜下形态学变化  40
    4.3 Bax，Bcl-2 蛋白免疫组化结果分析  40-42
    4.4 电镜下观察海马超微结构变化  42-43
    4.5 流式细胞仪测定结果  43-44
讨论  44-49
  1 关于动物模型的选择  44
  2 复方地黄对老年痴呆小鼠学习记忆能力的影响  44-45
  3 复方地黄对老年痴呆小鼠海马结构变化的影响  45-46
  4 复方地黄对老年痴呆小鼠 Bax，Bcl-2 蛋白的影响  46-47
  5 流式细胞仪结果分析  47
  6 中医学对复方地黄疗效的分析  47-48
  7 存在问题与展望  48-49
结论  49-50
致谢  50-51
参考文献  51-58
附录  58-66
个人简历  66-67
详细摘要  67-68

复方地黄汤防治转基因早老性痴呆小鼠（SAM-P/8）的实验研究

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