学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

抗猪脂肪细胞膜蛋白单链抗体文库的构建

作　者: 郝慧芳
导　师: 丁伟；苗向阳
学　校: 山西农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪特异性脂肪细胞膜蛋白 噬菌体展示 单链杭体 删减免疫法
分类号: S852.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
下　载: 62次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


本研究采用删减免疫法免疫动物，选用猪肝细胞作为耐受原腹腔免疫Ba1b／c小鼠，然后于免疫后15min、24h、48h腹腔注射环磷酰胺（Cyclophosphamide；CY）使小鼠对肝细胞膜表面抗原形成免疫耐受。免疫后10天眼球采血，经ce11-ELISA检测发现，CY100mg／kg剂量组血清抗体效价与未免疫小鼠接近，说明该剂量环磷酰胺可以使小鼠产生有效的免疫耐受。选取抗体效价低的小鼠用消化好的同种猪脂肪细胞经三次免疫后，ELISA检测抗体效价，选取抗体效价高的小鼠活体取脾脏用于获取抗体基因。 从经免疫的小鼠脾脏中用Trizol reagent一步法提取总RNA，用01igo（dT）-纤维素纯化mRNA，以此为模板反转录为cDNA第一链，采用RT-PCR以小鼠重链可变区VH和轻链可变区VL特异性引物扩增VH、VL基因片段，经重叠引物延伸PCR（SOE-PCR）把VH与VL用编码连接肽（Gly4Ser）3序列的Linker连接成单链抗体scFv基因，克隆入噬菌粒pCANTAB5E载体并转化E.coli TG1感受态细胞，在SOBAG上筛选转化子，并用M13K07超感染，获得了抗猪脂肪细胞膜蛋白单链抗体的噬菌体文库。 总之，通过对抗猪脂肪细胞膜蛋白单链抗体噬菌体文库的构建，我们对抗猪脂肪细胞膜蛋白单链抗体的研究进行了一定的摸索，这将为该抗体的进一步研究打下基础。该抗体库的建立，为以后的筛选和表达研究构建了一个平台。

全文目录


摘要  4-5
文献综述  5-24
  应用脂肪细胞膜免疫调控动物体脂含量  5-15
    1 脂肪组织的发育特点  6
    2 脂肪细胞膜免疫的机理  6-8
    3 脂肪细胞膜的被动免疫  8-13
    4 脂肪细胞膜的主动免疫  13
    5 脂肪细胞膜免疫技术的发展方向及应用前景  13-15
  单链抗体的研究和应用  15-24
    1 单链抗体构建的分子结构基础  15-16
    2 单链抗体的构建  16-19
    3 单链抗体的表达  19-21
    4 单链抗体的应用  21-24
实验部分  24-54
  1 引言  24-25
  2 仪器与试剂  25-32
    2.1 实验仪器  25-26
    2.2 实验试剂  26-32
  3 实验方法  32-46
  4 结果与分析  46-51
  5 讨论  51-54
结论  54-55
参考文献  55-62
英文摘要  62-63

相似论文

  1. 噬菌体库筛选小鼠胚胎干细胞特异结合多肽,Q813
  2. 内毒素休克小鼠肝脏血管特异性结合肽的体内筛选及鉴定,R459.7
  3. 鸡传染性支气管炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及其表位的鉴定,S852.65
  4. 日本血吸虫SJCHGC06868蛋白的研究,R383.2
  5. 从噬菌体展示肽库中筛选CCR5膜外第一胞外环(ECL-1)的结合肽及其抗炎作用的实验研究,R96
  6. 东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因（血清筛选）的研究,R392
  7. 丙型肝炎病毒非结构蛋白2反式调节基因NS2TP启动子结合蛋白的研究,R373.21
  8. 结肠癌特异性噬菌体多肽筛选与鉴定的初步研究,R735.35
  9. 鸡传染性支气管炎病毒（IBV）H52毒株病毒中和多肽的体外鉴定及S基因的克隆,S852.65
  10. 应用噬菌体展示技术(Phage Display)对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)抗原决定簇的研究,R392-33
  11. 抗呼吸道合胞病毒免疫噬菌体抗体库的构建及初步鉴定,R392
  12. 噬菌体展示技术筛选幽门螺旋杆菌单链抗体的研究,Q78
  13. 高效UV-致弱尾蚴单链抗体库的构建及Sj SCA66-68kDa ScFv的筛选,R392
  14. 结核分枝杆菌分泌蛋白64抗原模拟表位的筛选研究,R446.6
  15. 用T7噬菌体展示肽库筛选肺癌早期检测分子标志群,R734.2
  16. 肺癌和大肠癌早期筛查自身抗体标志群的筛选,R735.3
  17. 广谱趋化作用抑制剂的体内筛选及其活性鉴定,R96
  18. 利用体内噬菌体展示技术筛选及鉴定肺癌特异性结合多肽,R734.2
  19. 利用噬菌体展示技术筛选肺癌特异性多肽及新的肿瘤标志物,R734.2
  20. 人类APPL2蛋白PTB结构域的表达纯化及其功能的研究,Q78

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 家畜免疫学
© 2012 www.xueweilunwen.com