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降钙素在体内体外实验中对兔关节炎关节软骨退变及软骨下骨的骨代谢的影响

作　者: 李彬
导　师: 张柳
学　校: 华北煤炭医学院
专　业: 外科学
关键词: 骨性关节炎关节软骨软骨下骨降钙素骨代谢
分类号: R684.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:研究降钙素(Calcitonin,CT)在体内试验中对前交叉韧带切除术(ACLT)造成的兔膝关节炎模型中关节软骨的保护作用以及CT对软骨下骨骨代谢的影响。同时在体外实验中探讨CT对软骨细胞的保护机制。方法: 30只3月龄日本大耳白兔适应性饲养一周后随机分为三组,每组10只:Sham组,ACLT+CT组和ACLT+NS组。ACLT+CT组和ACLT+NS组行右膝关节前交叉韧带切断术,术后动物分笼喂养,自由活动。术后ACLT+CT组皮下注射鲑鱼降钙素(sCT)5IU/kg,每日一次,连续8周;ACLT+NS组则给予等剂量盐水,术后8周处死动物。解剖膝关节,肉眼大体观察膝关节外观,取股骨内侧髁制备石蜡切片行HE染色、并进行Mankin评分,免疫组化法检测Ⅱ型胶原、MMP-13的表达。取胫骨近端制成硬组织切片行骨形态计量学检测。取健康日本大耳白兔膝关节软骨,经消化将其软骨细胞在10%血清培养液DMEM中进行培养,将第3代软骨细胞接种到放有盖玻片的两个24孔培养板内,每个24孔板分三组:向IL-1β组加入人重组IL-1β(10ng/ml),保持5天,隔两天换液及IL-1β。IL-1β+CT组加入人重组IL-1β(10ng/ml)两天后,再向培养液中加入CT(50 ng/ml),再保持3天。正常组不加任何诱导剂和干扰剂培养5天。一个24孔板的软骨细胞进行MMP-13和Ⅱ型胶原免疫组化检测。另一个用于提取mRNA,Realtime RT-PCR法检测MMP-13和Ⅱ型胶原的表达。结果:(1)Sham组膝关节外观正常,关节面光滑,关节软骨呈淡蓝色,有光泽。ACLT+NS组胫骨平台和股骨髁均可见骨性肥大。滑膜亦呈现色浑浊节面粗糙不平整,无光泽,颜色暗红,关节软骨破坏,关节边缘有骨赘形成。ACLT+CT组膝关节面欠光滑,较光泽,部分区域颜色发暗。对照组大体的变化符合骨性关节炎的病理改变。Sham组和ACLT+CT组的Mankin评分均低于ACLT+NS组。(2)Sham组和ACLT+CT组软骨下骨小梁相对体积、厚度和数量等均显著高于ACLT+NS组;而Sham组和ACLT+CT组软骨下骨小梁分离度都低于ACLT+NS组。(3)通过免疫组化染色观察Sham组和ACLT+CT组的Ⅱ型胶原的表达均显著低高于ACLT+NS组(p<0.05);Sham组和ACLT+CT组MMP-13的表达都显著低于ACLT+NS组(p<0.05)。正常组和IL-1β+CT组的Ⅱ型胶原表达均明显高于IL-1β组而正常组和IL-1β+CT组的MMP-13的表达都低于IL-1β组(p<0.05)。(4)通过PCR法检测,在正常组和IL-1β+CT组中Ⅱ型胶原的mRNA表达均显著高于IL-1β组而正常组和IL-1β+CT组中MMP-13的mRNA表达都明显低于IL-1β组(p<0.05)。结论:(1)ACLT兔关节炎软骨退变,软骨下骨骨量下降,微观结构破坏。(2)通过体内体外实验证明降钙素可以增加软骨内Ⅱ型胶原的表达,降低MMP-13的表达量来达到保护关节软骨的作用。(3)降钙素通过调节软骨下骨的骨代谢,抑制软骨下骨骨量丢失,改善软骨下骨的微观结构,抑制骨关节炎的病理进程。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-8
英文缩写  8-9
研究论文：降钙素在体内体外实验中对兔关节炎关节软骨退变及软骨下骨的骨代谢的影响  9-52
  前言  9-11
  材料与方法  11-28
  结果  28-33
  讨论  33-39
  结论  39-40
  参考文献  40-46
  附图  46-52
综述：骨性关节炎病因和发病机制研究进展  52-63
  参考文献  58-63
致谢  63-64
个人简历  64

降钙素在体内体外实验中对兔关节炎关节软骨退变及软骨下骨的骨代谢的影响

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