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Livin、Caspase-3和MVD在膀胱癌中的表达及意义

作　者: 韩兴涛
导　师: 杨锦建
学　校: 郑州大学
专　业: 外科学
关键词: 膀胱癌 Livin蛋白 Caspase-3蛋白微血管密度
分类号: R737.14
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

膀胱癌是泌尿系统中最常见的肿瘤,在世界范围内,膀胱癌发病率居恶性肿瘤的第九位,男性中排名第六位,女性排在第十位之后;在我国,男性膀胱癌发病率位居全身肿瘤的第八位,女性排在第十二位之后。膀胱癌的发生机制至今尚不完全清楚,同体内其它器官肿瘤的发生一样,也是多种致癌的危险因素长期在正常细胞内作用,导致原癌基因的激活,继而经过一系列复杂的信号传导过程影响细胞周期的运转。在复制及转录过程中又因抑癌基因的缺失或失活不能修复受损的DNA,也不能使细胞进入正常的凋亡,使携带有异常DNA的细胞无限制地复制、增殖而致癌。Livin基因是2000年发现的抑制细胞凋亡基因,位于人染色体20 q13.3,全长4.6 kb,包含7个外显子及6个内含子,其基因转录产物有两种mRNA亚型,分别编码298个氨基酸蛋白质（α）和280个氨基酸蛋白质（β）。和其它IAPs家族成员一样,Livin基因含有BIR和RING指结构域,主要通过与Caspase家族相互作用,抑制其介导级联激活反应引起的细胞凋亡,促使肿瘤的发生。Livin在正常成人的大多数组织中（除了胎盘）均不表达,表皮、淋巴、脾脏和黑色素细胞中表达很低。在胎儿发育过程中多种组织高表达,如胎儿的脑、胸腺、肾脏和肝脏。研究发现Livin在一些癌细胞系中高表达,如淋巴瘤、HaCat细胞、MCF7乳腺癌细胞,以黑色素瘤细胞系中表达水平最高;在膀胱癌细胞中,Livin的α和β亚型均表达,但在膀胱癌中Livin、Caspase-3、MVD的表达及其与肿瘤复发的研究尚未见相关报道。本实验采用免疫组化SP法检测在正常膀胱组织、膀胱癌组织中Livin蛋白、Caspase-3蛋白的表达以及MVD的表达情况,并分析其相关性。目的探讨Livin、Caspase-3和MVD在膀胱癌发生发展中的作用,为膀胱癌的临床诊断、治疗和预后提供新的方法。材料与方法收集郑州大学第一附属医院2006年1月～2006年12月65例膀胱癌的手术切除标本,其中男38例,女27例,年龄29～78岁,平均62.5岁。术前均未接受过放疗或化疗。病理类型均为膀胱移行细胞癌。按WHO 1973年病理分级:Ⅰ级25例、Ⅱ级28例、Ⅲ级12例;临床分期:T_is-T₁期39例、T₂-T₄期26例;术后随访1.5～2年,其中28例术后复发,37例术后无复发。同时取10例癌旁正常组织（取自膀胱全切病例距肿瘤边缘＞5cm）作对照组。全部标本均用福尔马林固定,常规石蜡包埋,4um厚连续切片。使用兔抗人Livin多克隆抗体、兔抗人Caspase-3多克隆抗体以及鼠抗人CD34单克隆抗体,通过免疫组化SP法检测Livin、Caspase-3和CD34蛋白在65例膀胱癌组织、10例正常膀胱组织中的表达。统计分析采用SPSS10.0软件对数据进行处理,按照病理分级、临床分期、有无复发分类统计,对每个指标用X²检验、Fisher’s精确概率检验或t检验进行分析;Livin、Caspase-3之间的相关性用皮尔逊积差相关（Pearson）作相关分析,以α=0.05作为差异有统计学意义检验水准。结果1.Livin蛋白表达的阳性信号主要定位于癌细胞的胞浆和/或胞核,并且以胞浆为主。65例膀胱癌中有53例显示阳性表达,阳性率为81.54%（53/65）。10例正常膀胱组织中未见Livin蛋白阳性表达。Livin蛋白在膀胱癌中的表达明显高于正常膀胱组织,两者相比差异具有统计学意义（P=0.000）。Livin蛋白在膀胱癌不同病理分级Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级中的阳性表达率分别为:76.00%（19/25）、85.71%（24/28）、83.33%（10/12）,三组相比差异无统计学意义（P=0.651）;Livin蛋白在膀胱癌不同临床分期T_is-T₁期、T₂-T₄期中的阳性表达率分别为:79.49%（31/39）、84.62（22/26）,两组相比差异无统计学意义（P=0.845）;Livin蛋白在膀胱癌复发组、无复发组中的阳性表达率分别为92.86%（26/28）、70.27（26/37）,两组相比差异有统计学意义（P=0.024）。2.Caspase-3蛋白表达的阳性信号主要定位于癌细胞的胞浆和/或胞核,并且以胞浆为主。65例膀胱癌中有30例显示阳性表达,阳性率为46.15%（30/65）。10例正常膀胱组织中有9例Caspase-3蛋白阳性表达,阳性率为90.00%（9/10）。Caspase-3蛋白在正常膀胱组织中的表达明显高于膀胱癌,两者相比差异具有统计学意义（P=0.025）。Caspase-3蛋白在膀胱癌不同病理分级Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级中的阳性表达率分别为:68.00%（17/25）、35.71%（10/28）、25.00%（3/12）,三组相比差异有统计学意义（P=0.017）;经X²分割,检验水准α=0.0167,Ⅰ级与Ⅱ级之间差异无统计学意义（P=0.019）,Ⅰ级与Ⅲ级相比差异有统计学意义（P=0.014）,Ⅱ级与Ⅲ级相比差异无统计学意义（P=0.768）。Caspase-3蛋白在膀胱癌不同临床分期T_is-T₁期、T₂-T₄期中的阳性表达率分别为:48.72%（19/39）、42.31（11/26）,两组相比差异无统计学意义（P=0.612）;Caspase-3蛋白在膀胱癌复发组、无复发组中的阳性表达率分别为32.14%（9/28）、64.86（24/37）,两组相比差异有统计学意义（P=0.009）。3.在膀胱癌组织中,53例Livin蛋白阳性表达中,有34例Caspase-3蛋白呈阴性表达;12例Livin蛋白阴性表达中,有11例Caspase-3蛋白呈阳性表达;共同阳性表达有19例,共同阴性表达的有1例。用皮尔逊积差相关（Pearson）作相关分析显示:Livin蛋白与Caspase-3蛋白在膀胱癌组织中的表达呈负相关（P=0.000,r=-0.434）。4.血管内皮细胞染成棕黄色为CD34阳性。以显微镜在400倍视野下选取5个血管数目最多的视野,计数血管数,计算其平均数即为MVD。65例膀胱癌组织中的MVD为6.20～38.25个/高倍视野,平均值18.42±1.96。10例正常膀胱组织中的MVD为1.25～3.21个/高倍视野,平均值2.14±0.42。两者相比差异有统计学意义（P=0.000）。MVD在膀胱癌不同病理分级Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级中的平均值分别为:13.25±1.17、16.95±1.87、32.64±1.66,三组相比差异有统计学意义（P＜0.05）:Ⅰ级与Ⅱ级、Ⅰ级与Ⅲ级、Ⅱ级与Ⅲ级之间差异均有统计学意义（P＜0.05）。MVD在膀胱癌不同临床分期T_is-T₁期、T₂-T₄期中的平均值分别为:14.25±1.30、24.69±3.26,两组相比差异有统计学意义（P=0.000）;MVD在膀胱癌复发组、无复发组中的平均值分别为:22.63±2.61、12.86±1.15,两组相比差异有统计学意义（P=0.000）。结论1.Livin蛋白在膀胱癌组织中呈高表达,而在正常膀胱组织中无表达。Livin蛋白的表达可能与膀胱癌的病理分级、临床分期无关系;而与肿瘤有无复发有关系,可以作为评价膀胱癌预后的指标。2.Caspase-3蛋白在正常膀胱组织中呈高表达,在膀胱癌组织中表达降低。Caspase-3蛋白的表达与临床分期无关系;而与病理分级、肿瘤有无复发关系密切。Caspase-3蛋白表达下调可能与膀胱癌的发生以及预后呈正相关。3.在膀胱癌组织中,Livin蛋白的表达与Caspase-3蛋白呈负相关。提示Livin通过抑制Caspase-3的活性,导致Caspase-3介导的细胞凋亡不足可能是膀胱癌发生的机制之一。4.膀胱癌组织中MVD值明显高于正常膀胱组织。MVD值在膀胱癌的不同病理分级、临床分期以及肿瘤有无复发均有差异,提示其可以作为膀胱癌细胞生物学行为的一个指标,来预测膀胱癌的复发风险。

全文目录

摘要  3-7
Abstract  7-13
论文部分 Livin、Caspase-3和MVD在膀胱癌中的表达及意义  13-47
  引言  13-16
  材料和方法  16-22
  结果  22-32
  讨论  32-39
  结论  39-40
  附图  40-43
  参考文献  43-47
综述膀胱癌中细胞凋亡相关基因研究现状  47-65
  参考文献  58-65
缩略语表  65-66
致谢  66

Livin、Caspase-3和MVD在膀胱癌中的表达及意义

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