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蜂胶黄酮的提取及其抗氧化活性的研究

作　者: 王正
导　师: 周小理
学　校: 上海海洋大学
专　业: 应用化学
关键词: 蜂胶黄酮超声波超临界 HPLC GC-MS 抗氧化
分类号: TQ914.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

本文以蜂胶为原料,采用乙醇超声波提取和超临界二氧化碳萃取两种方法提取蜂胶中的黄酮类化合物,并确定其最佳提取工艺和参数。采用气质、液相色谱、紫外分光光度计测定其黄酮成分及含量。采用二苯代苦味肼基(DPPH·)自由基分析法、油脂抗氧化法等五种方法测定蜂胶黄酮提取物的抗氧化性能。主要实验结果如下：1、以芦丁为标准品、采用AlCl3法测定总黄酮结果稳定。在芦丁0-0.2mg/mL浓度范围内线性较好,标准曲线方程为Y=0.2936X+0.0025,其R2值为0.9997。五次重复测定的RSD值仅为1.222%；在五次加样回收率试验中,其平均加样回收率达到103.33%,RSD值为1.8%。表明此法精密度高、重现性好且回收率较高。2、采用甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚、三氯甲烷七种不同极性溶剂,提取蜂胶中黄酮类化合物的能力顺序为：丙酮>甲醇>乙醇>乙醚>正丁醇>乙酸乙酯>三氯甲烷。其中乙醇的提取能力稍低于丙酮和甲醇,综合考虑成本与溶剂毒性,实验选择乙醇为提取溶剂。3、通过正交实验表明乙醇超声波提取蜂胶的最佳工艺条件为：采用15倍量的无水乙醇浸提蜂胶12hr,超声提取3次,每次15rmin。4、通过对萃取压力、温度、时间、固液比、乙醇浓度的单因素实验可知：超临界CO2萃取的优化工艺参数为：萃取压力为25MPa,萃取温度50℃,萃取时间3.5小时,固液比6：1,乙醇浓度100%。5、采用分光光度计法测得最佳工艺条件下乙醇超声波提取蜂胶总黄酮含量(以芦丁计)为29.00%,超临界CO2萃取蜂胶总黄酮含量(以芦丁计)为15.21%。6、采用GC-MS顶空分析法对两种方法得到的蜂胶提取物挥发组分进行化学成分及含量的分析,结果表明：两种方法得到的蜂胶提取物在化学成分上存在差异。乙醇超声波提取蜂胶中只含有黄酮类化合物柏木烯,含量为1.37%。蜂胶超临界萃取物中含有1,8-桉叶油素、苏合香烯、3-甲基2-丁烯酸乙酯、三甲基枯烯、柏木烯、芳樟醇、柏木脑、乙位桉叶烯等黄酮化合物,其中1,8-桉叶油素含量较高,为2.2%。7、采用GC-MS固相微萃取对两种方法得到的蜂胶提取物进行黄酮组分及含量的分析,结果表明,乙醇超声波提取蜂胶中含有柏木烯、α-衣兰油烯、愈创木烯、甲位桉叶烯、姜烯、ar-姜黄烯、香橙烯、去氢白菖烯、α-白菖考烯、大茴香醛、子丁香烯、巴伦西亚桔烯、香兰素等黄酮类化合物,其中柏木烯、去氢白菖烯、子丁香烯含量较高。蜂胶超临界萃取物中含有柏木烯、α-衣兰油烯、甲位桉叶烯、ar-姜黄烯、去氢白菖烯、α-桉叶油醇、桉叶油醇、乙位桉叶油醇、香兰素、α-香柑油烯、乙位藿香烯、乙位桉叶烯、丁位杜松烯、白菖油萜、4-乙烯基儿茶酚等黄酮化合物,其中α-桉叶油醇、乙位桉叶油醇含量较高。8、以木犀草素、高良姜素、芹菜素、山奈酚、杨梅酮、柯因、芦丁、桑色素、槲皮素九种黄酮为标准品,采用HPLC对两种方法得到的蜂胶提取物进行黄酮组分及含量的分析,结果表明：蜂胶乙醇超声波提取物中有7种与测试标品相同成分的黄酮类化合物,7种黄酮类化合物总量为16.32%,其中高良姜素、柯因、槲皮素的含量较高,分别为4.91%、5.59%、4.01%。木犀草素、芹菜素、山奈酚的含量较少。蜂胶超临界萃取物中只含有高良姜素1.71%、柯因1.46%。9、通过五种不同的体系(油脂抗氧化、DPPH、羟基自由基·OH、亚硝酸盐(NO2-)、还原能力)研究了两种蜂胶黄酮提取物的抗氧化性能。结果表明：蜂胶乙醇超声波提取物和超临界萃取物在五种体系中都具有一定的抗氧化性能,而且随着浓度的增加而增强。10、两种方法提取蜂胶氨基酸含量都较低,分别为0.076%和0.026%。11、蜂胶乙醇超声波提取物和超临界萃取物残留铅含量均小于0.05mg/kg,符合食品法规中的限定要求。

全文目录

摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
目录  9-13
第一章蜂胶研究综述  13-22
  1 蜂胶概况  13-14
  2 黄酮化合物的研究现状  14-17
    2.1 概述  14
    2.2 结构分类  14-15
    2.3 黄酮类化合物的理化性质及显色反应  15-17
      2.3.1 性状  15-16
      2.3.2 溶解性  16
      2.3.4 显色反应  16-17
  3 蜂胶黄酮抗氧化性能研究进展  17-19
  4 蜂胶黄酮其他生理功能研究进展  19-20
  5 蜂胶产品的开发与应用  20-21
    5.1 食品工业  20
    5.2 农业与饲料工业  20-21
    5.3 日化工业  21
  6 课题研究的目的与意义  21-22
第二章蜂胶中黄酮类化合物含量测定方法的研究  22-29
  1 试验材料  22
    1.1 主要材料  22
    1.2 主要化学试剂  22
    1.3 主要仪器与设备  22
  2 试验方法  22-24
    2.1 黄酮类化合物含量的测定流程  22
    2.2 供试样品溶液的制备  22-23
    2.3 黄酮类化合物显色检测液检测波长的选择  23
    2.4 芦丁标准工作曲线的建立  23-24
    2.5 重现性试验  24
    2.6 显色稳定性试验  24
    2.7 回收率试验  24
    2.8 样品中黄酮类化合物含量的计算方法  24
  3 结果与分析  24-28
    3.1 黄酮类化合物显色检测液检测波长的确定  24-25
    3.2 芦丁标准工作曲线绘制  25-26
    3.3 重现性试验结果  26
    3.4 显色稳定性试验结果  26-27
    3.5 加样回收率试验结果  27-28
  4 小结  28-29
第三章蜂胶中黄酮类化合物提取方法的研究  29-40
  1 材料与仪器设备  29
    1.1 实验原材料  29
    1.2 主要化学试剂  29
    1.3 主要仪器和设备  29
  2 实验方法  29-31
    2.1 蜂胶超声波溶剂提取工艺  30
      2.1.1 工艺流程  30
      2.1.2 超声波提取正交实验设计  30
    2.2 蜂胶超临界萃取  30-31
      2.2.1 实验装置及流程图  30
      2.2.2 操作方法  30-31
      2.2.3 实验方案设计  31
  3 结果与分析  31-39
    3.1 蜂胶超声波溶剂提取工艺优化实验结果  31-36
      3.1.1 用甲醇作为溶剂浸提蜂胶  31-32
      3.1.2 用乙醇作为溶剂浸体蜂胶  32
      3.1.3 用乙酸乙酯作为溶剂浸体蜂胶  32-33
      3.1.4 用正丁醇作为溶剂浸体蜂胶  33-34
      3.1.5 用丙酮作为溶剂浸体蜂胶  34
      3.1.6 用三氯甲烷作为溶剂浸体蜂胶  34-35
      3.1.7 用乙醚作为溶剂浸体蜂胶  35
      3.1.8 提取工艺验证试验  35-36
    3.2 CO_2超临界萃取实验结果  36-39
      3.2.1 萃取压力实验  36-37
      3.2.2 萃取温度实验  37
      3.2.3 萃取时间实验  37-38
      3.2.4 固液比实验  38-39
      3.2.5 乙醇浓度实验  39
  4 小结  39-40
第四章蜂胶黄酮有效组分分析  40-56
  1 蜂胶乙醇超声波提取物和超临界萃取物GC-MS测定结果比较  40-45
    1.1 试验条件  40
      1.1.1 气相色谱条件  40
      1.1.2 质谱条件  40
    1.2 顶空进样分析结果  40-42
      1.2.1 蜂胶超临界萃取物  40-41
      1.2.2 蜂胶乙醇浸提物  41-42
    1.3 固相微萃取进样  42-45
      1.3.1 蜂胶超临界萃取物  42-43
      1.3.2 蜂胶乙醇浸提物  43-45
  2 蜂胶乙醇超声波提取物与超临界萃取物HPLC黄酮测定分析  45-53
    2.1 液相条件  46
    2.2 九种黄酮标品的标准曲线  46-51
    2.3 蜂胶乙醇超声波提取物黄酮含量分析结果  51-52
    2.4 蜂胶超临界萃取物黄酮含量分析结果  52-53
  3 蜂胶乙醇超声波提取物和超临界萃取物氨基酸含量的分析  53-54
    3.1 试验条件  53
    3.2 分析结果  53-54
  4 小结  54-56
第五章蜂胶黄酮抗氧化性能的研究  56-68
  1 材料与仪器设备  56-57
    1.1 实验原材料  56
    1.2 主要化学试剂  56
    1.3 主要仪器和设备  56-57
  2 蜂胶黄酮提取物抗氧化性能测定的方法与原理  57-60
    2.1 清除1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基(DPPH·)能力测定  57
      2.1.1 试验原理  57
      2.1.2 DPPH·配制  57
      2.1.3 操作方法  57
    2.2 油脂抗氧化能力测定  57-58
      2.2.1 试验原理  57-58
      2.2.2 操作方法  58
    2.3 清除羟基自由基(OH·)能力测定  58-59
      2.3.1 试验原理  58-59
      2.3.2 操作方法  59
    2.4 清除亚硝酸盐测定  59-60
      2.4.1 试验原理  60
      2.4.2 操作方法  60
    2.5 还原能力测定  60
      2.5.1 试验原理  60
      2.5.2 操作方法  60
  3 试验结果与讨论  60-66
    3.1 清除1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基(DPPH)能力测定结果  60-62
      3.1.1 九种黄酮标品清除DPPH自由基能力比较  60-61
      3.1.2 不同溶剂提取物清除DPPH自由基能力比较  61-62
      3.1.3 蜂胶乙醇超声波提取物和超临界萃取物清除DPPH自由基能力分析  62
    3.2 蜂胶黄酮提取物对油脂抗氧化能力实验结果  62-64
      3.2.1 蜂胶不同溶剂浸提物对猪油的抗氧化效果  62-63
      3.2.2 蜂胶乙醇超声波提取物抗油脂氧化能力实验结果  63-64
      3.2.3 蜂胶超临界萃取物抗油脂氧化能力实验结果  64
    3.3 蜂胶黄酮提取物清除羟基自由基(OH·)的能力  64-65
    3.4 蜂胶黄酮提取物清除亚硝酸盐(NO_2~-)的能力  65
    3.5 蜂胶黄酮提取物的还原能力  65-66
  4 小结  66-68
第六章结论  68-71
参考文献  71-77
附录  77-78
致谢  78

蜂胶黄酮的提取及其抗氧化活性的研究

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