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八氯二丙醚遗传毒性与作用机理研究及车间空气检测

作　者: 曾垂焕
导　师: 唐萌
学　校: 东南大学
专　业: 卫生毒理学
关键词: 八氯二丙醚氧化损伤 DNA蛋白交联微核试验 DNA合成羰基含量 DNA荧光定量气相色谱/质谱联用
分类号: R134
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 64次
引　用: 3次
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内容摘要

八氯二丙醚(S2)是农药增效剂的主要品种之一。它对拟除虫菊酯类农药、氨基甲酸酯类、有机磷类农药均有增效作用,广泛用于蚊香、喷雾剂、气雾剂和熏蒸剂,配有增效剂的制剂作为农田杀虫剂的品种制剂,在解决抗药性的问题上效果良好。关于S2安全性的研究国内外均有报道,包括一般毒性、遗传毒性、免疫毒性等,但对其遗传毒性的评价结论并不一致。为深入探讨S2的遗传毒性,本研究进行了体外细胞培养、整体动物实验及接触人群方面的研究。通过DNA蛋白交联试验、微核试验、蛋白质氧化试验以及DNA合成影响试验,探讨了S2在体外及动物体内实验条件下的遗传毒性,并从氧化应激的角度阐述了其毒性机理;应用气相色谱/质谱联用法检测了成品S2与生产原料在车间空气中的浓度,并进行了生产工人DNA蛋白交联、p53蛋白等生物指标的监测;以及S2与人体血红蛋白体外相互作用的研究,通过上述研究工作为进一步评价S2的遗传毒性与毒作用机理,及制定S2生产的职业卫生标准提供科学依据。在体外细胞实验研究中采用MTT法测出S2对CHL细胞的半数生长抑制浓度(IC50)为5.478μg/ml。在此基础上进行氧化损伤实验,结果表明,一定浓度的S2在染毒24h及48h时可诱导CHL细胞产生大量羟自由基,从而导致抗氧化酶活性发生改变,进而影响NO合成与代谢,导致脂质过氧化的发生。应用DNA荧光定量测定方法,检测了S2对CHL细胞的DNA合成的影响,结果显示,染毒浓度为0.20μg/ml及以上时,随着染毒浓度的增加,DNA合成减少,而在该浓度以下时则表现为DNA合成增加;0.25μg/ml脱离染毒后4、6、12h内则表现为DNA合成继续减少。采用SDS-KCL沉淀法检测了S2对CHL细胞DNA蛋白的交联作用,结果显示,染毒0.5、1.0、2.0μg/ml浓度的S2可引起CHL细胞DNA-蛋白质交联率较对照组明显升高(P<0.05)。同时检测了S2染毒不同时间对CHL细胞微核率的影响,结果未见S2有诱发CHL细胞微核率升高的作用。在整体动物试验方面检测了不同染毒浓度S2(282,564,1128 mg/m3,每天1h,连续染毒20d)对小鼠各脏器的氧化损伤情况,结果表明,小鼠肺、肝、脾SOD、GSH-Px的活性高剂量(1128 mg/m3)染毒组与对照组比较有显著性差异(P<0.05);肺MDA含量随染毒剂量的增加而增加,且呈剂量-反应关系(r=0.987,P<0.05)。各脏器羰基化蛋白含量的测定结果显示,肺、肝、脾蛋白出现了不同程度的氧化损伤(P<0.05),其中肺组织蛋白损伤最为明显,高、中、低剂量组和对照组相比差异有统计学意义,且有明显的剂量-反应关系(r=0.975,P=0.0248),肝、脾组织影响较小,仅高剂量组与对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。在DNA-蛋白质交联(DPC)方面,肺DNA-蛋白质交联率随染毒剂量的增加而增加,高、中、低剂量组与对照组比较,差异均有显著性,但并不呈剂量-反应关系,肝仅高剂量(1128 mg/m3)组与对照组比有显著性差异(P<0.05),肾、脾则各浓度组之间均未见异常。采用荧光染色法观察了染毒不同时间对小鼠外周血网织红细胞微核率的影响,结果未见S2有诱发网织红细胞微核率升高的作用。应用气相色谱/质谱联用法分析了生产车间空气中成品与原料的浓度,结果显示S2仅在成品出口采样点检测到,浓度为1.33 mg/m3,而其它各采样点均可检测到三氯乙烯,浓度范围为0.83～21.82 mg/m3,此外在不同的作业岗位还有二氯甲烷、一氟丙烯、丙烯等有机物的存在。采集S2作业人群静脉血检测氧化损伤、DNA-蛋白质交联及p53蛋白表达情况,结果表明,接触组血清SOD、GSH-Px酶活性略高低于对照组,差异无显著性,而脂质过氧化产物MDA的增高与对照组相比差异具有统计学意义。生产工人DNA-蛋白质交联率则显著增高,且这种损伤程度与年龄、吸烟等因素不存在关联性(P>0.05),接触组血清p53蛋白水平略高于对照组,差异无显著性,但在接触组中工龄大于8年的人群

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摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
前言  10-12
第一章八氯二丙醚遗传毒性及其毒作用机制的体外细胞实验研究 3 第  12-26
  第一节八氯二丙醚对 CHL 细胞急性毒性实验  12-15
  第二节八氯二丙醚对 CHL 细胞氧化损伤作用  15-18
  第三节八氯二丙醚对 CHL 细胞 DNA 合成影响  18-21
  第四节八氯二丙醚对 CHL 细胞 DNA 蛋白交联作用  21-24
  第五节八氯二丙醚对 CHL 细胞微核率影响的研究  24-26
第二章八氯二丙醚遗传毒性及其毒作用机制的整体动物实验研究  26-38
  第一节八氯二丙醚吸入染毒对小鼠脏器组织的氧化损伤作用  26-30
  第二节八氯二丙醚吸入染毒对小鼠脏器组织的蛋白质氧化作用  30-33
  第三节八氯二丙醚吸入染毒对小鼠脏器组织的 DNA 蛋白交联作用  33-36
  第四节八氯二丙醚吸入染毒小鼠不同时间段外周血细胞微核试验  36-38
第三章八氯二丙醚生产车间空气采样检测及接触人群的相关研究  38-51
  第一节八氯二丙醚生产车间空气采样检测  38-45
  第二节现场生产工人外周血氧化损伤及 DNA 蛋白交联测定  45-48
  第三节现场生产工人血清 p53 蛋白水平的检测  48-51
第四章八氯二丙醚与血红蛋白体外相互作用的研究  51-54
总结  54-56
参考文献  56-61
综述  61-66
作者简介  66-67
致谢  67

八氯二丙醚遗传毒性与作用机理研究及车间空气检测

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