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PKCδ抑制剂对脂多糖诱导大鼠肺微血管内皮细胞损伤的干预作用

作　者: 朱钟鸣
导　师: 孙耕耘
学　校: 安徽医科大学
专　业: 呼吸内科
关键词: 蛋白激酶C 肺微血管内皮细胞脂多糖单层通透性大鼠
分类号: R563.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

目的：研究蛋白激酶C的亚型PKCδ在大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)中的表达，通过观察脂多糖(LPS)诱导的RPMVEC损伤时PKCδ表达的变化，以及PKCδ抑制剂楸毒素(Rottlerin)对单层通透性增高的干预作用。探讨PKC特异性亚型在LPS诱导的RPMVEC损伤中的作用。方法：在体外分离、培养的RPMVEC的基础上进行PKCδ的Western印迹和免疫组化检测，以及LPS作用后PKCδ表达的变化。用针头式滤器检测LPS及LPS+Rottlerin干预后RPMVEC单层滤过系数(Kf)的变化。结果1 体外成功分离培养RPMVEC，经形态学、Ⅷ因子相关抗原及FITC-BSI结合实验证实所获得为RPMVEC；在细胞传代时采用含有EDTA的胰蛋白酶，缩短了消化传代的时间，减少了传代过程中胰蛋白酶对细胞的损伤；成功进行了细胞的冷冻和复苏，为今后的实验打下基础。2 首先通过采用免疫组化的方法明确了PKCδ在RPMVEC中有广泛的表达，其表达部位位于胞浆。Western印迹检测PKCδ出现一条蛋白印迹条带，分子质量与蛋白质分子质量Mark相比，约为77KD，进一步证实了PKCδ在RPMVEC中存在。采用10μg／ml LPS作用RPMVEC 60min后与正常对照组比较，PKCδ表达明显增高。3 10μg／mlLPS、5μM／L Rottlerin分别作用15、30、60、90、120min，LPS组RPMVEC单层的Kf值较对照组显著增高，Rottlerin组较对照组无明显差异。Rottlerin+LPS组各时相点Kf值显著低于LPS组。结论：1 成功进行原代培养RPMVEC，形态学、Ⅷ因子相关抗原及FITC-BSI结合实验证实所获得为RPMVEC、并在对传代方法改进后成功对细胞进行冷冻和复苏。2 采用免疫组化的方法证实了PKCδ在RPMVEC中有表达，其表达部位在细胞浆；LPS可导致RPMVEC表达PKCδ增高。3 采用PKCδ特异性抑制剂Rottlerin可部分抑制LPS导致的RPMVEC单层通透性增高，LPS导致RPMVEC单层通透性增高的机制可能为激活了细胞内的PKC途径。

全文目录

英文缩略词表  4-5
中文摘要  5-6
英文摘要  6-8
前言  8-9
1.大鼠肺微血管内皮细胞的培养和鉴定  9-12
  1.1 材料和方法  9-12
  1.2 结果  12
2.免疫组化方法检测PKCδ在大鼠肺微血管内皮细胞中的表达部位  12-14
  2.1 材料和方法  12-14
  2.2 结果  14
3.LPS对PKCδ在大鼠肺微血管内皮细胞内表达的影响  14-19
  3.1 材料和方法  14-19
  3.2 结果  19
4.PKCδ对LPS诱导的大鼠肺微血管内皮细胞损伤的干预作用  19-22
  4.1 材料  19-20
  4.2 方法  20-21
  4.3 统计学处理  21
  4.4 结果  21-22
5.讨论  22-28
结论  28-29
参考文献  29-33
照片  33-36
附录  36-37
致谢  37-38
综述  38-44

PKCδ抑制剂对脂多糖诱导大鼠肺微血管内皮细胞损伤的干预作用

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