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腺病毒介导CTLA4Ig基因转染联合供者特异性细胞输注诱导小鼠皮肤移植耐受的研究

作　者: 张海滨
导　师: 肖序仁
学　校: 中国人民解放军军医进修学院
专　业: 泌尿外科
关键词: 移植耐受 CTLA4Ig基因转染脾细胞骨髓细胞嵌合体皮肤移植
分类号: R699
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
下　载: 25次
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内容摘要

诱导受者对供者的特异性免疫耐受是解决临床器官移植中免疫排斥问题的根本性解决方案。尽管人们对诱导免疫耐受的策略已经进行了多方面的探讨，并在动物试验中取得了一些成功，但真正具有临床应用可行性的耐受诱导方案并不多。其中，阻断T细胞活化的共刺激信号联合供者特异性骨髓移植建立异基因混合嵌合体，是目前所知最具临床应用前景的一种耐受诱导策略。而近年来，通过基因治疗的方法转染CTLA4Ig阻断B7／CD28共刺激信号在动物试验中也取得了较好的诱导移植耐受结果。本研究构建了包含CTLA4Ig基因的重组腺病毒载体。尝试通过腺病毒载体转染CTLA4Ig基因，联合供者特异性脾细胞及骨髓细胞输注，在组织相容性抗原完全不同的小鼠品系间诱导皮肤移植耐受。并在细胞及分子水平上对耐受机制进行了初步探讨。主要内容报告如下。 1．将CTLA4Ig基因克隆进入腺病毒穿梭载体pCA13，此穿梭载不区进0yX院顾土·’H）论t 二体与腺病毒骨架质粒PJMI7共转染293细胞，通过质粒间同源重组不建产生了可表达C几A一乃基因的腺病毒载体M／C几A4Ig，并经 RT－PCR及Western Blot检坝证买了重组病毒的正确性。 2．RT－PCR及ELISA检坝表明：重组病毒 Ad／CTLA41g 2 X 10’PFU 经尾静脉注入BALB八小鼠后，24小时内即可在小鼠肝细胞内表达并释放入血，一周后可获得较高水平的表达，其体内表达时间可持续 30天以上。 3．在施行BALB／C一C57BL／6，1、鼠皮肤移植的当日，给予受者B6 小鼠尾静脉注射重组病毒 Ad／CTLA4 2 XIO‘PFU／鼠，并榆入供者 BALB／Cd’鼠脾细月IXIO／鼠，移植第5 日榆入供者骨髓细月IX 10’／鼠。j己录移植皮片的存活时间，通过叮H检测、MLR及其逆转实验、嵌合体分析及仙八型细胞困子检测探讨耐受机理。结果表明：这种 Ad／CTLA4Ig＋DST＋BMT6处理方案可以明显的特异性延长供者＊、鼠皮肤移植物的存活时间，移植皮片平均存活3 4．8天，DTll及皿R检测证实受者产生了对供者的特异性低反应性，肌R中的这种低反应性可以被外源性的IL刁所部分逆转，该处理可在受者体内形成持续30天以上的外周嵌合状态，细胞困子检测发现耐受小鼠细胞因子转录与空白对照相比没有明显差异。 4．在 Ad／CTLA4＋DST＋BMT处理方案的基石出上，在输入骨髓细胞前一天，即皮肤移植第4 日，给予受者小鼠腹腔注射马利兰入’I）｛进修‘＃tta侧土学位沦义〕 25mg从g，可以明显提高该方案诱导供者特异性皮肤移植耐受和形成嵌合体的效果。移值皮片平均存活时间延长至69．8天，外周嵌合水平升高，持续时间延长至60天以上，并证实有胸腺内嵌合体的形成。

全文目录

中文摘要  4-7
英文摘要  7-10
前言  10-12
材料与方法  12-34
结果  34-51
讨论  51-63
结论  63-64
参考文献  64-72
综述  72-81
  参考文献  78-81
中英文缩写词对照  81-83
致谢  83

腺病毒介导CTLA4Ig基因转染联合供者特异性细胞输注诱导小鼠皮肤移植耐受的研究

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