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垂体腺瘤细胞系建立及相关性研究

作　者: 史彦芳
导　师: 王洪
学　校: 河北大学
专　业: 外科学
关键词: 垂体腺瘤细胞系嵌合体型无功能垂体腺瘤单克隆性
分类号: R736.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的初步体外建立人垂体腺瘤细胞系,研究该细胞系相关性特征,探讨垂体腺瘤发生侵袭性的机制。材料与方法收集我院2008年9月-2010年10月的垂体腺瘤标本50例。对这些病历资料进行分析研究,按照Hardy-Wilson及Knosp分级、分期标准,在判断垂体腺瘤的侵袭性方面,同时考虑患者的硬脑膜侵袭情况及肿瘤周围组织的病理情况,将本实验进行分组,本实验将肿瘤标本分为非侵袭性组(30例)和侵袭性组(20例)两组。分别采用1.原代细胞培养法2.透射电子显微镜观察3.扫描电子显微镜观察4.G显带法5.DNA倍体分析6.上清激素测定7.免疫细胞化学SP法对体外培养细胞进行研究；用Spss16.0系统软件统计分析本组研究数据。结果1、体外培养垂体腺瘤细胞常规染色体分析及G显带法：证实为嵌合体型,正常染色体中1、3、7、10号缺失,4、6、18、19、22号有1条染色体,2、8、9、11、12、13、15、20、21号有2条染色体,5、16、17号有3条染色体,14号有4条染色体。X1条染色体有脆位点,疑似Y有1条染色体2、体外培养垂体腺瘤细胞DNA倍体分析显示与呈现嵌合体方向发展的趋势,增殖率也有明显提高。3、体外培养垂体腺瘤细胞中催乳素分泌水平测定,实验组细胞上清液中催乳素分泌水平分别为(2.97±0.08)ng/ml、(2.91±0.97)ng/ml、(0.92±0.30)ng/ml、(1.12±0.50)ng/ml、(0.62±0.17)ng/ml、(0.40±0.06)ng/ml；对照组分别为(145.26±42.70)ng/ml、(96.90±27.60)ng/ml、(7.82±3.08)ng/ml、(2.85±0.99)ng/ml、(0.52±0.45)ng/ml、(0.35±0.03)ng/ml。两组标本的激素测定差异有统计学意义(均P<0.05),实验组中不同代数的无功能垂体腺瘤来源细胞-F的上清液中催乳素水平低于对照组上清液中催乳素水平。4、体外培养垂体腺瘤细胞超微结构观察：透射电镜可见：细胞呈卵圆形,核质比例大,染色质丰富,胞质丰富,大量线粒体具有灶性肿胀和空化,胞质内可见分泌颗粒圆形均匀致密,分布稀疏；有膜包被,直径为150～220nm；细胞膜表面有微绒毛。扫描电镜可见：细胞大小不甚一致,细胞表面有微绒毛,可见到分裂期细胞；微绒毛放大后可见其呈杆状,顶端彭大呈球状。5、体外培养垂体腺瘤细胞免疫细胞化学检测：实验组：抗人垂体催乳素多克隆抗体染色阳性,胞质内可见黄棕色颗粒,经阳性与阴性细胞计数显示,阳性率为98%。对照组及空白组均为阴性。余4种抗体染色检测均为阴性。6、体外培养垂体腺瘤细胞镜下形态呈：半贴壁生长,其形状为球形及多角不规则状,可见胞浆内许多细小颗粒,胞核位于一侧,核浆比例大,状态良好及单克隆：细胞传30代,经以上各项实验证实传代细胞生长良好,并具有单克隆性。结论1.、体外培养垂体腺瘤细胞的染色体为嵌合体型。2.、DNA倍体分析显示与呈现嵌合体方向发展的趋势,这些畸变的染色体与垂体腺瘤的增殖、分泌功能相关。3、体外培养垂体腺瘤细胞中具有神经内分泌特性,该肿瘤细胞中区域染色体DNA单链断裂和DNA损伤修复酶受到抑制时,其表达增强,脆性位点的出现与肿瘤的发生有关、且增加该携带者的风险性。4、体外培养垂体腺瘤细胞催乳素抗体阳性,因染色体的变化,导致了组蛋白修饰相关酶与细胞周期蛋白家族的密切关系,同样导致肿瘤细胞增殖失控。5、体外培养垂体腺瘤具有单克隆性。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-12
第1章绪论  12-15
  1.1 研究目的和意义  12
  1.2 体外培养垂体腺瘤细胞面临的困难  12-13
  1.3 垂体腺瘤细细形态结构检测  13-14
  1.4 体外培养垂体腺瘤细胞的功能学研究  14
  1.5 体外培养垂体腺瘤细胞的基因学研究  14-15
第2章材料和方法  15-28
  2.1 临床资料  15-16
    2.1.1 研究对象  15
    2.1.2 垂体腺瘤的分级、分期及侵袭性的判断标准  15-16
  2.2 实验仪器与试剂  16-17
  2.3 实验方法  17-28
    2.3.1 原代细胞培养法  17-19
      2.3.1.1 实验步骤  18-19
      2.3.1.2 实验结果的判定  19
      2.3.1.3 统计学处理  19
    2.3.2 体外培养细胞的透射电子显微镜观察  19-20
      2.3.2.1 实验步骤  20
      2.3.2.2 实验结果的判定  20
      2.3.2.3 统计学处理  20
    2.3.3 体外培养细胞的扫描电子显微镜观察  20-21
      2.3.3.1 实验步骤  21
      2.3.3.2 实验结果的判定  21
      2.3.3.3 统计学处理  21
    2.3.4 体外培养细胞的G显带法  21-23
      2.3.4.1 实验步骤  22
      2.3.4.2 实验结果的判定  22-23
      2.3.4.3 统计学处理  23
    2.3.5 体外培养细胞的DNA倍体分析  23-24
      2.3.5.1 实验步骤  23-24
      2.3.5.2 实验结果的判定  24
      2.3.5.3 统计学处理  24
    2.3.6 体外培养细胞上清激素测定  24-25
      2.3.6.1 实验步骤  24
      2.3.6.2 实验结果的判定  24-25
      2.3.6.3 统计学处理  25
    2.3.7 免疫组织化学技术S-P法  25-28
      2.3.7.1 实验步骤  25-26
      2.3.7.2 实验结果的判定  26-27
      2.3.7.3 统计学处理  27-28
第3章结果  28-31
  3.1 体外培养垂体腺瘤常规染色体分析及G显带法  28-29
  3.2 体外培养垂体腺瘤DNA倍体分析显示  29
  3.3 体外培养垂体腺瘤细胞中催乳素分泌水平测定  29
  3.4 体外培养垂体腺瘤细胞超微结构观察  29-30
  3.5 体外培养垂体腺瘤细胞免疫细胞化学检测  30
  3.6 体外培养垂体腺瘤细胞形态及单克隆  30-31
第4章讨论  31-33
  4.1 体外培养人垂体腺瘤细胞的成活性  31
  4.2 肿瘤形成与染色体畸变有关  31
  4.3 染色体的变化作为垂体腺瘤发病机理的一部分  31-32
  4.4 垂体腺瘤染色体的多倍性  32-33
第5章结论  33-34
参考文献  34-36
附图  36-37
综述  37-52
致谢  52-53
攻读学位期间取得的科研成果  53

垂体腺瘤细胞系建立及相关性研究

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