学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

噬菌体SPP1重组酶介导的枯草芽胞杆菌同源重组系统的初步研究

作　者: 胡婷
导　师: 温廷益
学　校: 中国科学技术大学
专　业: 遗传学
关键词: 枯草芽胞杆菌噬菌体重组酶同源重组系统寡核苷酸
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 74次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

芽胞杆菌为能够产生芽胞的革兰氏阳性菌,且具有分泌蛋白能力强、发酵基础良好等特性,在生物合成酶制剂、维生素、氨基酸、核苷及抗病毒类药物中具有广泛的应用。近年来,随着分子生物学的快速发展,芽胞杆菌的遗传操作方法日臻成熟。但是实验操作步骤繁琐和引入抗性标记等问题在一定程度上制约了芽胞杆菌菌种的定向改造和基因工程菌的构建。因此,建立高效、快速的新型芽胞杆菌遗传操作系统具有重要的意义。本研究以芽胞杆菌模式菌株Bacillus subtilis W168为研究对象,通过将噬菌体SPP1的重组酶基因整合到染色体中,构建枯草芽胞杆菌同源重组底盘菌。此外,通过定向改造标记基因,构建突变株,对该系统的有效性进行初步研究,建立噬菌体重组酶介导的同源重组系统。本研究以实验室已构建的B. subtilis W168 mutS基因突变株为出发菌株,首先构建了携带噬菌体SPP1重组酶基因的枯草芽胞杆菌整合载体pAX01-GP34.1-GP35-GP36,并将该载体成功整合B. subtilis W168?mutS染色体的lacA位点。在大肠杆菌中克隆表达噬菌体重组酶三个相关蛋白GP34.1、GP35和GP36,制得兔多克隆抗体。利用Western-blot检测证明上述三个基因在B. subtilis W168?mutS中成功表达,获得噬菌体重组酶介导的同源重组系统底盘菌。为进一步研究噬菌体重组酶同源重组系统的有效性,本论文设计两端具有20-30 bp同源序列且引入无义突变的核苷酸片段,通过多轮转化定向改造底盘菌尿嘧啶磷酸核糖基转移酶upp基因,经抗性筛选和基因测序验证,成功获得upp基因定向改造工程菌。证明了本研究所构建的枯草芽胞杆菌噬菌体重组酶介导同源重组系统的有效性,并初步建立了噬菌体重组酶介导的枯草芽胞杆菌寡核苷酸同源重组方法。本研究所建立的同源重组系统为枯草芽胞杆菌遗传操作提供了一种新方法,省略了体外DNA酶切和连接等步骤,在不引入抗性标记的前提下,使外源DNA成功整合到宿主菌染色体上,实现染色体DNA定点修饰,从而为枯草芽胞杆菌生产菌种定向改造提供了新的理论策略与技术支持。

噬菌体SPP1重组酶介导的枯草芽胞杆菌同源重组系统的初步研究

内容摘要

全文目录

相似论文