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As_2O_3联合Annexin Ⅱ反义寡核苷酸抑制膀胱癌BIU-87细胞侵袭力的研究

作　者: 陈潇雨
导　师: 陈奎生；赵志华
学　校: 郑州大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 膀胱癌 BIU-87细胞 三氧化二砷 AnnexinⅡ 反义寡核苷酸 凋亡
分类号: R737.14
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


膀胱癌是泌尿系统中最常见的恶性肿瘤之一。世界范围内,膀胱癌发病率在恶性肿瘤中位居第九位。在我国肿瘤患者中,男性膀胱癌发病率位居第八位。近年来,我国部分城市报告显示膀胱癌发病率在逐年递增。AnnexinⅡ是Annexins家族中的一员,又被称为AnnexinA2、P36、LipoeortinⅡ,是一类钙依赖性磷脂结合蛋白,AnnexinⅡ可分布于细胞表面、细胞核、细胞浆,其功能较多,包括参与信息转导、DNA的合成、细胞迁移、细胞增殖等。AnnexinⅡ具有促进肿瘤侵袭及转移的作用,另外还有参与抗凋亡等作用。AnnexinⅡ在多种类型的肿瘤中均可观察到表达异常,近年来研究发现AnnexinⅡ在胃癌、胰腺导管腺癌、肝细胞肝癌、结肠癌、肺癌等肿瘤中均有异常表达,并且已证明其与肿瘤的侵润转移或预后相关。三氧化二砷(As203)是砒霜的主要成分,较早用于慢性粒细胞白血病、风湿、湿疹以及非何杰金病等多种疾病的治疗。其作用机制经体外及体内实验均已证明诱导细胞分化或促进细胞凋亡是其发挥疗效的两种主要方式。另外,As203对其他许多恶性肿瘤也具有良好的治疗效果,如胃癌、肝癌、肺癌、膀胱癌、前列腺癌等。反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide, ASODN)是指进行了某些化学修饰的短链核酸(约15-25个核苷酸组成),其碱基顺序排列与特定的靶标RNA序列互补,进入细胞后可按照Watson-Crick碱基互补配对的原则与靶标序列形成双链结构。现阶段恶性肿瘤的基因治疗方法比较多,反义核酸技术目前是最成熟、前景最广的技术之一。反义寡核苷酸与靶标基因的RNA结合后可通过多种不同的机制影响靶标基因的表达。反义寡核苷酸技术不但能诱导肿瘤细胞凋亡,而且还能够使肿瘤细胞对化疗药物的敏感性增加,将来必定会成为基因治疗的首选药物。本研究采用不同浓度As2O3、AnnexinⅡASODN,另设二者联合组(As2O3和AnnexinⅡASODN)、空白对照组,分别处理膀胱癌BIU-87细胞24h、48h、72h。采用免疫细胞化学、原位杂交检测各组膀胱癌BIU-87细胞中AnnexinⅡ蛋白及mRNA表达；采用Boyden chamber侵袭实验检测膀胱癌BIU-87细胞侵袭力情况。材料和方法1.膀胱癌BIU-87细胞株由北京大学泌尿外科研究所惠赠。2.膀胱癌BIU-87细胞的培养：复苏膀胱癌BIU-87细胞,RPMI-1640培养液(含10%胎牛血清,青霉素100u/ml,链霉素100u/m1),37℃、5%CO2孵箱内贴壁培养。3.膀胱癌BIU-87细胞复苏、孵育以及传代分组。As203单独作用组：用三种不同浓度(2、4和6μmol/L)的As203处理BIU-87细胞24h、48h、72h; AnnexinⅡASODN单独作用组：用三种不同浓度(6、12和18μmol/L)的AnnexinⅡASODN转染膀胱癌BIU-87细胞24h、48h、72h；联合处理组：As2O3(6μmol/L)联合AnnexinⅡASODN(18μmol/L)处理BIU-87细胞24h、48h、72h；同时设空白对照组。4.采用免疫细胞化学检测处理后膀胱癌BIU-87细胞中AnnexinⅡ蛋白及mRNA表达。5.采用原位杂交检测处理后膀胱癌BIU-87细胞中AnnexinⅡ蛋白及mRNA表达。6.采用Boyden chamber侵袭实验检测膀胱癌BIU-87细胞侵袭力情况。7.统计学处理：应用SPSS10.0统计软件进行统计学处理。结果1.与空白对照组相比,三种不同浓度的AnnexinⅡASODN处理膀胱癌BIU-87细胞24h、48h、72h,各组细胞AnnexinⅡ蛋白及mRNA表达均下降,且差异均具有统计学意义(P均<0.05)。同时间段内随着AnnexinⅡASODN转染浓度的增加细胞AnnexinⅡ蛋白及mRNA的表达减弱,且两两之间的差异均具有统计学意义(P均<0.05)；同一转染浓度组,随时间的延长,细胞中AnnexinⅡ蛋白及mRNA的表达也均减弱,并且两两之间的差异也均具有统计学意义(P均<0.05)。2.与空白对照组相比,三种不同浓度的As203处理膀胱癌BIU-87细胞24h、48h、72h,各组细胞AnnexinⅡ蛋白及mRNA的表达均下降,且差异均有统计学意义(P均<0.05)。同时间段内随着As203浓度的增加,细胞AnnexinⅡ蛋白及mRNA的表达均减弱,并且两两之间的差异均具有统计学意义(P<0.05)；同一浓度处理组中,随时间的延长,AnnexinⅡ蛋白及mRNA的表达也均下降,两两之间的差异均有统计学意义(P均<0.05))。3.As203联合AnnexinⅡASODN处理膀胱癌BIU-87细胞24h、48h、72h,与空白对照组相比细胞AnnexinⅡ蛋白及mRNA的表达均明显减弱,且差异均有统计学意义(P均<0.05)；随时间的延长,AnnexinⅡ蛋白及mRNA的表达也均降低,且差异均有统计学意义(P均<0.05)；与两者单独作用24h、48h、72h相比,细胞AnnexinⅡ蛋白及mRNA的表达下降更为明显,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。4、与空白对照组相比,As203及AnnexinⅡASODN及联合组均可抑制膀胱癌BIU-87细胞的侵袭力,差异具有统计学意义(P<0.05)；联合组抑制更为明显。结论1.As203可抑制膀胱癌BIU-87细胞中AnnexinⅡ蛋白、mRNA的表达及BIU-87细胞的侵袭力。2.AnnexinⅡASODN可抑制膀胱癌BIU-87细胞中AnnexinⅡ蛋白、mRNA的表达及BIU-87细胞的侵袭力。3.As203联合AnnexinⅡASODN具有明显的协同作用。

全文目录


摘要  4-8
Abstract  8-14
英文缩略词索引  14-15
前言  15-17
材料和方法  17-27
结果  27-30
讨论  30-39
结论  39-40
附图  40-44
参考文献  44-47
综述部分 AnnexinⅡ的研究现状  47-56
  参考文献  54-56
附录部分  56-57
  个人简历及硕士研究生期间发表的论文  56-57
  致谢  57

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 泌尿器肿瘤 > 膀胱肿瘤
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