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靶向增殖诱导配体（APRIL）的RNA干扰对人结直肠癌裸鼠移植瘤的影响

作　者: 王敬春
导　师: 王惠民
学　校: 南通大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 增殖诱导配体 结直肠癌 裸鼠 RNA干扰
分类号: R735.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的在裸鼠体内利用RNA干扰（RNAi）技术研究裸鼠结直肠癌移植瘤内敲低增殖诱导配体（APRIL）基因后对移植瘤的抑制影响,以及APRIL基因对人结直肠癌的促细胞增殖、侵袭转移、凋亡抑制作用。方法建裸鼠SW480结直肠癌肿瘤模型,瘤块内注射APRIL的小干扰RNA（siRNA）,仔细观察裸鼠的生存状况、移植瘤的出现和生长情况。实验结束后取出皮下瘤块,利用PCR和免疫组织化学（IHC）链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法分别检测APRIL siRNA对APRIL mRNA和蛋白表达的下调作用。为了检测APRIL siRNA对移植瘤的活性的影响,IHC SP两步法检测移植瘤内增殖细胞核抗原（PCNA和Ki67）,分析APRIL表达下调对移植瘤增殖的影响;IHC SP法检测基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）,观察对移植瘤转移活性的影响;检测凋亡抑制蛋白（bcl-2蛋白和bcl-xl蛋白）用以评价APRIL siRNA对SW480移植瘤凋亡活性的影响,原位末端标记法（TUNEL）法检测肿瘤细胞凋亡变化;HE染色方法检测APRIL siRNA对移植瘤坏死的影响。此外,先获得APRIL siRNA稳定转染的SW480细胞株和pGC-vector稳定转染的SW480细胞株,然后将稳定转染的和未转染的SW480细胞移植到BALB/c裸鼠体内,仔细观察裸鼠移植瘤的发生发展,实验结束取出移植瘤检测APRIL siRNA对移植瘤的抑制作用。结果荧光定量PCR方法检测APRIL的mRNA与18S rRNA的比值分别为APRIL siRNA组（0.13±0.05）×10-3、空载体组（0.95±0.04）×10-3、PBS对照组（0.96±0.5）×10-3,在APRIL siRNA组,APRIL mRNA较PBS组降低了（86.45±0.50）%,APRIL蛋白降低了（87.5±5.0）%（P<0.05）。APRIL siRNA组SW480移植瘤生长缓慢,瘤块体积和重量明显降低,P<0.05。APRIL siRNA （sh637和sh1750）组肿瘤生长抑制率（IR）为（55.1±1.4）%。APRIL siRNA（sh637和sh1750）组PCNA比PBS组平均降低了（56.5±2.0） %,APRIL siRNA（sh637和sh1750）Ki67比PBS组平均降低了（86.80±0.70）%,MMP-2和MMP-9蛋白表达（sh637和sh1750）组比PBS组平均降低了（80.50±0.30）%和（79.8±0.50）%,APRIL siRNA（sh637和sh1750）组bcl-2和bcl-xl蛋白分别平均降低了（82.6±4.5）%和（79.2±3.5）%,P<0.05。TUNEL结果显示APRIL siRNA组凋亡细胞明显增多,凋亡率增高。稳定转染了APRIL siRNA（sh637）的SW480细胞株,移植瘤出现时间较未转染组较晚,且移植瘤的生长速度缓慢。各组移植瘤内的增殖（Ki67和PCNA）、侵袭（MMP-2和MMP-9）和凋亡抑制（bcl-2和bcl-xl）等指标检测结果与实验一相一致,稳定转染APRIL siRNA的SW480移植瘤内这些检测指标均较对照组移植瘤内低表达,P<0.05。两个实验均证实APRIL siRNA降低了裸鼠移植瘤内APRIL表达,抑制了SW480在裸鼠体内的增殖和侵袭转移,促进了细胞凋亡,从而导致了SW480移植瘤的抑制作用。结论APRIL siRNA抑制了SW480结直肠癌移植瘤的生长、增殖、转移,促进了细胞凋亡。证实了APRIL对结直肠癌的重要作用,APRIL有望作为结直肠癌治疗的靶点。

全文目录


摘要  5-7
Abstract  7-10
前言  10-12
实验一 瘤块内注射APRIL siRNA 对裸鼠体内SW480 结直肠癌的影响  12-37
  1. 材料和仪器  12-17
  2. 方法与步骤  17-25
  3. 结果  25-34
  4. 讨论  34-36
  5. 结论  36-37
实验二 APRIL 对SW480 细胞在裸鼠体内致瘤性研究  37-48
  1. 材料和仪器  37-38
  2. 方法与步骤  38-40
  3. 结果  40-46
  4. 讨论  46-47
  5. 结论  47-48
参考文献  48-51
英文缩写词表  51-53
综述  53-65
  综述参考文献  62-65
在攻读硕士学位期间公开发表的论文与参加的项目  65-66
  A：公开发表的论文  65
  B：所参加的项目  65
  C：所获奖项  65-66
致谢  66

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肠肿瘤
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