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RNA干扰抑制ERCC1对非小细胞肺癌化疗敏感性的影响（体外实验）

作　者: 宋志雨
导　师: 王家辉；周航
学　校: 遵义医学院
专　业: 肿瘤学
关键词: RNA干扰 ERCC1基因 非小细胞肺癌 A549/DDP细胞 顺铂耐药
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：探讨利用RNA干扰技术沉默ERCC1基因表达对非小细胞肺癌耐药细胞株顺铂化疗敏感性的影响。方法：常规培养肺癌A549/DDP细胞；设计并合成靶向人的ERCC1基因的ERCC1-siRNA1、ERCC1-siRNA2、ERCC1-siRNA3、NC ERCC1-siRNA,构建携带ERCC1-shRNA的重组质粒表达载体,采用脂质体Lipofectamine2000转染入人肺癌细胞株A549/DDP,荧光镜下观察并测定转染效率；应用实时定量RT-PCR检测转染前后ERCC1mRNA的表达情况；应用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测干扰ERCC1后A549/DDP细胞对顺铂敏感性的变化。结果：1.分别于转染24h、36h、48h后收获细胞,应用实时荧光定量RT-PCR检测ERCC1-siRNA干扰对各组细胞ERCC1mRNA表达水平的影响。转染24h后ERCC1-siRNA1组相对表达量为(0.580±0.015),ERCC1-siRNA2组为(0.732±0.365),ERCC1-siRNA3组为(0.441±0.563),与空白对照组、NC ERCC1-siRNA组相比,ERCC1mRNA表达均下调(P<0.05),而ERCC1-siRNA3组有显著差异(P<0.01)；转染36h后,ERCC1-siRNA1组相对表达量为(0.576±0.468),ERCC1-siRNA2组为(0.652±0.273), ERCC1-siRNA3组为(0.212±0.236),与空白对照组、NC ERCC1-siRNA组相比,ERCC1mRNA表达下调(P<0.05),ERCC1-siRNA3组有显著差异(P<0.01)；转染48h后,ERCC1-siRNA1组相对表达量为(0.556±0.134),ERCC1-siRN A2组为(0.618±0.025),ERCC1-siRNA3组为(0.206±0.089),与空白对照组、NC ERCC1-siRNA组相比,ERCC1mRNA表达下调(P<0.05),而ERCC1-siRNA3组有显著差异(P<0.01)；各组内比较,无明显差异(P>0.05)。2.MTT实验结果表明,转染后肺癌A549/DDP细胞对顺铂IC50值降低；其中空白对照组对顺铂的IC50值为19.72±2.98ug/ml,转染ERCC1-siRNA1、ERCC1-siRNA2、ERCC1-siRNA3后A549/DDP细胞对顺铂的IC50值分别为4.59±1.56u/ml.5.61±2.11ug/ml.0.88±3.01ug/ml；与空白对照组相比,均有差异(P<0.05)；而转染阴性对照组NC ERCCl-siRNA的A549/DDP细胞对DDP的IC50为18.26±2.74ug/mL,与空白对照组相比无显著差异(P>0.05)。结论：利用RNA干扰技术能够筛选出高效的特异阻断ERCC1基因表达的siRNA: ERCC1基因表达下调能够增加肺癌A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,部分逆转耐药。

全文目录


英文缩略词表  5-6中文摘要  6-8Abstract  8-10前言  10-11材料与方法  11-23结果  23-28讨论  28-32结论  32-33参考文献  33-36综述  36-51  参考文献  46-51附图  51-52致谢  52-53作者简介  53

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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