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益气解毒方对鼻咽癌裸鼠移植瘤细胞黏附结构系统的影响

作　者: 许卉
导　师: 田道法；何迎春
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 中西结合临床医学
关键词: 鼻咽癌转移机制细胞黏附特性益气解毒方干预效应
分类号: R739.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：观察益气解毒方对鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤细胞黏附特性的影响及对相关黏附蛋白信号传导通路的调控效应,从细胞黏附干预角度探讨益气解毒中药抗鼻咽癌细胞转移的相关机制。方法：动物随机分为模型组、益气解毒中药预防组、益气解毒中药治疗组、甲氨蝶呤阳性对照组,应用人鼻咽癌CNE2细胞建立裸鼠移植瘤模型,分别按照给药方案用药,动态观察各组裸鼠移植瘤生长情况测量移植瘤体积,绘制移植瘤生长曲线；观察期满后处死动物,取瘤体称重,分别计算抑瘤率,并切取标本制片,光镜下观察比较各组移植瘤细胞的病理形态学变化；制作超薄切片,透射电镜下观察比较各组移植瘤细胞黏附结构的超微病理变化；免疫组化SABC法检测比较各组裸鼠移植瘤组织细胞黏附活性相关蛋白Rac1、IQGAP1、E-Cadherin、β-catenin表达水平变化。结果：益气解毒方预防组、益气解毒方治疗组与甲氨蝶呤阳性对照组的移植瘤体积均较小,与模型组相比较,差异均具有统计学意义(P<0.01～0.05)；3组的抑瘤率分别为58.35%、30.03%、52.94%。移植瘤组织的光镜和透射电镜观察均显示,模型组瘤细胞增殖活性最为旺盛,益气解毒方预防组、益气解毒方治疗组、甲氨蝶呤阳性对照组瘤细胞的核仁均较模型组小,细胞连接黏附结构保存良好,细胞周围较为光滑,指状突起减少；益气解毒方预防组和益气解毒方治疗组还可见瘤细胞大片坏死区域及炎性细胞浸润。移植瘤组织细胞黏附活性相关蛋白的免疫组化SABC法检测显示,模型组与益气解毒方预防组、益气解毒方治疗组、甲氨蝶呤阳性对照组相比较,其Rac1、IQGAP1表达活性较高,差异具有统计学意义(P<0.01)；益气解毒方预防组、益气解毒方治疗组、甲氨蝶呤阳性对照组E-Cadherin、β-catenin蛋白表达水平较高,与模型组相比较差异具有统计学意义(P<0.01)。结论：益气解毒方预防性给药和治疗性给药均对CNE2鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的转移相关性细胞黏附特性变化具有干预效应,其机制可能与该方阻抑肿瘤细胞黏附特性的降低趋势有关,但预防性用药和治疗性用药的作用方式可能不尽相同。

全文目录

中文摘要  6-8
Abstract  8-11
前言  11-13
1.材料与方法  13-22
  1.1 实验材料  13-16
    1.1.1 细胞  13
    1.1.2 动物  13
    1.1.3 中药药物  13
    1.1.4 主要试剂  13-14
    1.1.5 主要仪器  14-15
    1.1.6 主要溶液配制  15-16
  1.2.实验方法  16-18
    1.2.1 细胞悬液制备  16
    1.2.2 实验药物制备  16-17
    1.2.3 动物饲养  17
    1.2.4 动物分组  17
    1.2.5 细胞接种  17
    1.2.6 给药方法  17-18
    1.2.7 标本收集与处理  18
  1.3.指标观察  18-21
    1.3.1 动物行为观察  18
    1.3.2 移植瘤生长曲线绘制及抑瘤率测定  18-19
    1.3.3 病理形态学观察  19-20
    1.3.4 透射电镜标本制备及超微病理观察  20
    1.3.5 免疫组化法检测移植瘤组织细胞薪附相关蛋白Rcal、 E-Cadherin、IQGAPI、p-etaenin表达水平  20-21
  1.4 统计学处理  21-22
2.结果  22-34
  2.1 裸鼠移植瘤的制备  22
  2.2 裸鼠行为状态观察  22
  2.3 裸鼠皮下移植瘤生长曲线及动物体重变化情况  22-24
  2.4 瘤细胞连接关系的病理组织学观察  24
  2.5 瘤细胞黏附结构的透射电镜观察  24-25
  2.6 细胞黏附相关蛋白表达水平的免疫组化检测结果  25-34
    2.6.1 Rac1蛋白  25
    2.6.2 IQGAP1蛋白  25-26
    2.6.3 E-Cadherin蛋白  26
    2.6.4 β-catenin蛋白  26-34
3. 讨论  34-46
  3.1 中医学对鼻咽癌的认识  34-36
  3.2 益气解毒方组方原则及依据  36-40
  3.3 Racl、IQGAPI、E-eadherin、p-eatenin蛋白与肿瘤细胞薪附特性  40-43
  3.4 益气解毒方对人鼻咽癌CNEZ细胞移植瘤裸鼠生物学特性的影响  43
  3.5 益气解毒方对细胞勃附相关蛋白Racl、IQGAPI、E-Cadherin、 p-etaenin表达活性的影响  43-46
小结  46-47
致谢  47-48
参考文献  48-50
附录:文献综述  50-55
  参考文献  54-55

益气解毒方对鼻咽癌裸鼠移植瘤细胞黏附结构系统的影响

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