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天蚕素A-蛙皮素杂合肽、抗菌肽DermaseptinS4、丽蝇抗病毒肽Alloferon1体外抗病毒活性研究

作　者: 曹云飞
导　师: 李晓明；王曙阳
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 动物医学
关键词: PRRSV NDV 抗菌肽Dermaseptin S4 天蚕素A-蛙皮素杂合肽 丽蝇抗病毒肽Alloferon1 细胞病变 抗病毒活性
分类号: S859.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:研究抗菌肽Dermaseptin S4(DS4)、天蚕素A-蛙皮素杂合肽(CA-MA)和丽蝇抗病毒肽Alloferon1(Alloferon1)体外对猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)和新城疫病毒(NDV)的抑制作用,初步探究其作用机制,为研制抗PRRSV和NDV药物提供理论依据。方法:分别以Marc-145和BHK-21细胞培养增殖的PRRSV和NDV为研究对象,采用不同的给药方式(同时、感染前、感染后),运用噻唑篮(MTT)比色法观察细胞病变(CPE),测定吸光度值(D490nm)和半数细胞感染量(TCID50),以细胞存活率和对PRRSV、NDV的抑制率为指标,确定抗菌肽Dermaseptin S4、天蚕素A-蛙皮素杂合肽和丽蝇抗病毒肽Alloferon1对PRRSV、NDV的抑制强度。结果:1.抗菌肽Dermaseptin S4体外对PRRSV有抑制作用,抑制强度与其浓度成正比,差异极显著(P<0.01)。DS4对PRRSV的抑制作用与其作用方式有关,三种作用方式相比较,DS4对PRRSV直接灭活效果最强。2.抗菌肽Dermaseptin S4体外对NDV也有抑制作用;三种作用方式相比较,直接灭活效果最好,但不及对PRRSV的作用明显。3.天蚕素A-蛙皮素杂合肽体外对PRRSV有抑制作用,抑制效果远不及DS4、Alloferon1和拉米夫定对照。4.天蚕素A-蛙皮素杂合肽体外对NDV也有一定的抑制作用,三种作用方式相比较,CA-MA对NDV的直接灭活效果较好,但不及对PRRSV的直接灭活作用。而对NDV对靶细胞的吸附、侵入的阻断和NDV在靶细胞中增殖的抑制作用不明显。5.丽蝇抗病毒肽Alloferon1体外对PRRSV有抑制作用,抑制强度与其浓度呈正比。三种作用方式相比较,Alloferon1对PRRSV直接灭活效果最好,不及DS4。但Alloferon1对PRRSV对靶细胞的吸附、侵入的阻断和PRRSV在靶细胞中增值的抑制作用强于DS4和CA-MA。6.丽蝇抗病毒肽Alloferon1体外对NDV也有抑制作用,抑制效果明显高于DS4和CA-MA。三种作用方式相比较,Alloferon1对NDV直接灭活效果最好。结论:1.抗菌肽Dermaseptin S4、丽蝇抗病毒肽Alloferon1和天蚕素A-蛙皮素杂合肽在体外对PRRSV和NDV都有一定的抑制作用,抑制作用与其浓度成正相关。2.抗菌肽Dermaseptin S4、丽蝇抗病毒肽Alloferon1和天蚕素A-蛙皮素杂合肽在体外对PRRSV和NDV的抑制作用与其作用方式有关,其中直接灭活效果最好。3.抗菌肽Dermaseptin S4体外对PRRSV的直接灭活效果最好,对NDV在靶细胞中增殖的抑制作用最弱。4.丽蝇抗病毒肽Alloferon1体外对NDV的直接灭活效果最好,对NDV在靶细胞中增殖的抑制作用最弱,但强于抗菌肽Dermaseptin S4和CA-MA。5.丽蝇抗病毒肽Alloferon1在体外抗PRRSV和NDV的活性最好,天蚕素A-蛙皮素杂合肽体外抗PRRSV和NDV的活性最差。

全文目录


摘要  3-5
SUMMARY  5-11
第一部分 文献综述  11-28
  第一章 抗菌肽的研究进展  11-16
    1 抗菌肽的发现与性质  11-12
    2 抗菌肽的结构和分类  12
    3 抗菌肽的作用机制  12-13
    4 抗菌肽的生物学功能及应用前景  13-16
      4.1 抗菌肽在水产领域的应用  14
      4.2 抗菌肽在畜牧业领域的应用  14-15
      4.3 抗菌肽在医药、食品领域的应用  15-16
  第二章 抗菌肽天蚕素A-蛙皮素杂合肽、抗菌肽DERMASEPTIN S4、丽蝇抗病毒肽ALLOFERON1 研究进展  16-23
    1 抗菌肽DERMASEPTIN S4 的研究进展  16-19
      1.1 DS4 抗病毒作用的研究  17
      1.2 DS4 抗菌作用研究  17-18
      1.3 DS4 其他作用  18
      1.4 DS4 国内外研究进展  18-19
    2 抗菌肽天蚕素A－蛙皮素杂合肽的研究进展  19-21
      2.1 天蚕素A-蛙皮素杂合肽的概述  19-20
      2.2 CA-MA 杂合肽的结构  20-21
      2.3 CA-MA 杂合肽作用特点及应用前景  21
    3 丽蝇抗病毒肽ALLOFERON1 的研究进展  21-23
  第三章 猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒和新城疫病毒的研究进展  23-25
    1 猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒的研究进展  23-24
    2 新城疫病毒研究进展  24-25
  第四章 筛选抗病毒药物方法的研究进展和实验方法的确定  25-28
    1 筛选抗病毒药物方法的研究进展  25-26
    2 实验方法的确定  26-28
第二部分 实验研究  28-65
  第一章 研究目的、意义与主要内容  28-30
    1 研究目的、意义  28
    2 主要研究内容  28-30
  第二章 天蚕素A-蛙皮素杂合肽、抗菌肽DERMASEPTIN S4、丽蝇抗病毒肽ALLOFERON1 体外抗猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒的活性实验  30-46
    1 材料  30
      1.1 三种活性肽及主要试剂  30
      1.2 细胞和病毒株  30
      1.3 仪器  30
    2 方法  30-36
      2.1 药品配制  30-32
      2.2 MARC-145 细胞复苏  32
      2.3 MARC-145 细胞传代培养  32
      2.4 MARC-145 细胞生长曲线的测定  32-33
      2.5 三种活性肽的活性检测及对MARC-145 细胞最大无毒浓度（TC0）的测定  33-34
      2.6 PRRSV 复苏  34
      2.7 PRRSV 半数感染量(TCID50)的测定  34
      2.8 体外抗病毒试验  34-35
      2.9 抑制试验  35-36
      2.10 统计学分析  36
    3 结果与分析  36-43
      3.1 MARC-145 细胞生长曲线  36
      3.2 三种活性肽的活性检测和对MARC-145 细胞最大无毒浓度（TC0）的测定结果  36-37
      3.3 PRRSV 半数感染量(TCID_(50))的测定结果  37-38
      3.4 三种活性肽对PRRSV 吸附、侵入细胞的阻断作用  38-39
      3.5 三种活性肽对PRRSV 的直接灭活作用  39-41
      3.6 三种活性肽对PRRSV 增殖的抑制作用  41-42
      3.7 三种活性肽及拉米夫定对PRRSV 在MARC-145 细胞中增殖的影响  42-43
    4 小结与讨论  43-46
      4.1 DS4 体外抗PRRSV 的活性关系  43
      4.2 CA-MA 体外抗PRRSV 的活性关系  43-44
      4.3 ALLOFERON1 体外抗PRRSV 的活性关系  44-46
  第三章 天蚕素A-蛙皮素杂合肽、抗菌肽DERMASEPTIN S4、丽蝇抗病毒肽ALLOFERON1 体外抗新城疫病毒的活性实验  46-60
    1 材料  46
      1.1 活性肽及主要试剂  46
      1.2 细胞和病毒株  46
      1.3 仪器  46
    2 方法  46-50
      2.1 药品配制  46
      2.2 BHK-21 细胞复苏  46
      2.3 BHK-21 细胞传代培养  46-47
      2.4 BHK-21 细胞生长曲线的测定  47-48
      2.5 三种活性肽的活性检测和对BHK-21 细胞最大无毒浓度（TC_0）的测定  48
      2.6 NDV 复苏  48
      2.7 NDV 半数感染量(TCID50)的测定  48-49
      2.8 体外抗病毒试验  49
      2.9 抑制试验  49-50
      2.10 统计学分析  50
    3 结果与分析  50-57
      3.1 BHK-21 细胞生长曲线  50
      3.2 三种活性肽的活性检测和对BHK-21 细胞最大无毒浓度（TC_0）的测定结果  50-51
      3.3 NDV 半数感染量(TCID50) 的测定结果  51-52
      3.4 三种活性肽对NDV 吸附、侵入细胞的阻断作用  52-54
      3.5 三种活性肽对NDV 的直接灭活作用  54-55
      3.6 三种活性肽对NDV 增殖的抑制作用  55-56
      3.7 三种活性肽及拉米夫定对NDV 在BHK-21 细胞中增殖的影响  56-57
    4 小结与分析  57-60
      4.1 DS4 体外抗NDV 的活性关系  57-58
      4.2 CA-MA 体外抗NDV 的活性关系  58
      4.3 ALLOFERON1 体外抗NDV 的活性关系  58-60
  第四章 总结  60-65
    1 DS4 体外抗PRRSV 和NDV 的活性关系  60-61
    2 CA-MA 体外抗PRRSV 和NDV 的活性关系  61-62
    3 ALLOFERON1 体外抗PRRSV 和NDV 的活性关系  62-65
结论  65-66
参考文献  66-73
致谢  73-74
个人简介  74-75
导师简介  75-76

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医药物学 > 兽医药物基础科学
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