学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

热休克因子1正显性突变体对防治帕金森病的研究

作　者: 徐亮亮
导　师: 邹江英
学　校: 中国科学技术大学
专　业: 细胞生物学
关键词: α-synuclein 帕金森病 热休克因子1 热休克蛋白 6-羟基多巴胺
分类号: R742.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 36次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


α-synuclein聚集与细胞毒性在帕金森病的形成过程中发挥着重要的作用。热休克蛋白是具有细胞保护功能的一类分子伴侣家族,它们几乎存在于所有的细胞中。最近研究证明一些热休克蛋白能够抑制α-synuclein的聚集与毒性。在真核细胞中,热休克因子1(heat shock transcription factor 1,HSF1)是细胞内热休克蛋白基因表达的主要调节因子,它在非应激条件下被包含HSP90等的抑制性复合体抑制以非活化形式存在,只有在受到应激时才会暂时活化。对HSF1进行缺失突变和点突变等改造可使HSF1在正常条件下具有组成性活性,即在非应激条件下诱导激活细胞内热休克蛋白的表达。本论文的重点是研究HSF1的正显性突变体对α-synuclein聚集及毒性的影响。实验证明在人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞内过表达α-synuclein与EGFP融合蛋白——α-syn-EGFP,可以形成α-synuclein免疫阳性的聚集体,并且引起细胞死亡。HSF1正显性突变体能够在SH-SY5Y细胞内激活多种热休克蛋白的表达,如HSP70、HSF27和HSP90等。共表达HSF1(+)能够显著降低α-synuclein的蛋白水平,抑制α-synuclein免疫阳性包涵体的形成,并且能够显著减少α-synuclein过表达引起的细胞毒性。此外,HSF1正显性突变体还能显著抑制神经毒素6-羟基多巴胺引起的细胞凋亡。这些数据表明HSF1(+)能够在过表达α-synuclein和6-羟基多巴胺诱导的帕金森病细胞模型中发挥重要的保护作用,这提示我们HSF1(+)可能在防治帕金森病方面具有一定的应用价值。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-9
第一章 背景综述  9-25
  1.1 α-synuclein 与帕金森病  9-14
    1.1.1 α-synuclein 基因  10-11
    1.1.2 α-synuclein 蛋白结构  11-14
  1.2 帕金森病模型  14-15
    1.2.1 神经毒素诱导的动物模型  14
    1.2.2 基因敲除及转基因动物模型  14-15
    1.2.3 体外模型  15
  1.3 热休克蛋白  15-17
    1.3.1 热休克蛋白的功能  15-16
    1.3.2 热休克蛋白的分类  16-17
  1.4 热休克因子  17-21
    1.4.1 热休克因子的结构  17-18
    1.4.2 HSF1 的活化  18-19
    1.4.3 正显性HSF1 突变体与负显性HSF1 突变体  19-21
  1.5 帕金森病与热休克蛋白关系的研究  21-23
  1.6 帕金森病的治疗  23-24
  1.7 研究意义  24-25
第二章 材料与方法  25-39
  2.1 材料  25-27
    2.1.1 细胞  25
    2.1.2 菌种  25
    2.1.3 质粒  25
    2.1.4 引物  25-26
    2.1.5 仪器  26
    2.1.6 主要试剂  26-27
  2.2 方法  27-39
    2.2.1 感受态细菌的制备  27
    2.2.2 总RNA 的提取  27
    2.2.3 第一链cDNA 合成  27-28
    2.2.4 PCR 扩增α-synuclein 基因  28-29
    2.2.5 PCR 产物的回收  29-30
    2.2.6 酶切、连接反应  30-32
    2.2.7 质粒的小量提取  32-33
    2.2.8 质粒的大量提取  33-34
    2.2.9 转染及稳定细胞系构建  34
    2.2.10 western blot  34-36
    2.2.11 双荧光报告系统检测  36-37
    2.2.12 免疫荧光  37
    2.2.13 细胞毒性检测  37
    2.2.14 含有α-synuclein 免疫阳性包涵体的细胞计数  37-38
    2.2.15 统计分析  38-39
第三章 结果  39-52
  3.1 α-syn-EGFP 质粒构建  39-44
  3.2 HSF1(+)在SH-SY5Y 细胞内激发多种HSPs 的表达  44-46
  3.3 HSF1(+) 降低α-synuclein 的表达及其形成的聚集体  46-49
  3.4 稳定表达HSF1(+)的稳定细胞系的构建  49-50
  3.5 HSF1(+) 降低α-synuclein 的细胞毒性  50
  3.6 HSF1(+)抑制6-OHDA 引起的细胞凋亡  50-52
第四章 讨论  52-59
第五章 结论和展望  59-61
参考文献  61-68
硕士在读期间发表的学术论文  68-69
致谢  69

相似论文

  1. 脐血间充质干细胞移植治疗帕金森大鼠的实验研究,R742.5
  2. 公牛HSP基因多态性与精液品质及后裔性能的相关分析,S823
  3. 应用Bac-to-Bac杆状病毒表达体系在sf9细胞中重组表达保守性多巴胺能神经营养因子,R346
  4. 拘束冷应激对大鼠组织超微结构及HSP70表达的动态影响,S858.91
  5. 帕金森病患者的认知功能研究,R742.5
  6. 帕金森病个体化诊疗的依从性与疾病进展的相关性分析,R742.5
  7. 阿米洛利通过自噬途径保护PC12细胞的研究,R329
  8. MRI在多系统萎缩、进行性核上性麻痹和原性帕金森病诊断及鉴别诊断中的应用研究,R445.2
  9. 中国汉族人群TGF-β1启动子-509C/T基因多态性与帕金森病的相关性的研究,R742.5
  10. 15-差向异构体—脂氧素A4对脂多糖诱导小胶质细胞内活性氧产生的影响及其机制研究,R363
  11. 血浆HSP70水平与冠心病的相关性研究,R541.4
  12. UbiquitinB在17-AAG诱导HeLa细胞周期阻滞中的作用研究,R737.33
  13. 帕金森病患者经脑深部电刺激治疗后非运动症状临床综合调查分析,R742.5
  14. 汞中毒性白内障中HSP70和MT-Ⅱ蛋白表达变化,R776.1
  15. 17-DMAG对肝癌HepG2细胞的作用研究,R735.7
  16. CMT2L型转基因小鼠的基因鉴定与行为学分析,R746
  17. BST1基因rs4698412多态性与散发性帕金森病关联研究,R742.5
  18. 新疆维吾尔族、汉族帕金森病Parkin基因多态性研究,R742.5
  19. 帕金森病嗅觉障碍的相关性研究,R742.5
  20. 慢性间断性缺氧对帕金森病模型鼠纹状体氧化应激的影响,R742.5
  21. 海藻糖对alpha突触核蛋白聚集的影响,R742.5

中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学 > 脑部疾病 > 震颤麻痹综合征
© 2012 www.xueweilunwen.com