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GSK-3β在曲古抑菌素A诱导的细胞毒效应中的作用

作　者: 刘翩
导　师: 蒋幼凡
学　校: 重庆医科大学
专　业: 内科学
关键词: 糖原合成酶激酶-3β 肺癌曲古抑菌素A p27 E-cadherin 细胞周期侵袭力
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的探讨糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)在曲古抑菌素A (trichostatin A ,TSA)诱导的肺腺癌A549细胞生长抑制、周期阻滞和抑制肿瘤细胞浸润转移中的作用及其可能机制。方法常规传代培养A549细胞,分组予以不同浓度的TSA干预和GSK-3β酶抑制剂预处理后进行相关实验;MTT比色法检测TSA对A549细胞增殖的影响,并用GSK-3β特异性小分子抑制剂SB216763抑制GSK-3β活性后,观察上述浓度的TSA对A549细胞生长的作用效果;流式细胞仪分析用酶抑制剂干预前后TSA作用A549细胞的周期变化;Transwell小室法检测抑制GSK-3β活性前后TSA对A549细胞的侵袭力的影响;Western Blot法检测不同浓度的TSA对A549细胞中GSK-3β、磷酸化的GSK-3β(pGSK-3β)蛋白和粘附分子E-cadherin蛋白表达水平及用酶抑制剂预处理后TSA作用A549细胞24h上述蛋白水平的变化;免疫细胞化学法检测予酶抑制剂前后各组细胞中细胞周期素依赖性激酶抑制剂p27的蛋白水平。结果1、MTT法结果显示TSA抑制A549细胞的增殖,此作用呈剂量依赖性(P<0.05);TSA使A549细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.05);用酶抑制剂SB216763预处理后明显减弱了TSA对A549细胞的生长抑制作用和细胞周期阻滞(P<0.05)。2、Transwell小室侵袭实验显示A549细胞具有一定的体外侵袭力,TSA作用后A549细胞的侵袭力减弱,随着TSA浓度的增加,A549细胞侵袭力减弱越明显,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05);用酶抑制剂SB216763预处理后A549细胞侵袭力较单用TSA组增加(P<0.05)。3、Western Blot法和免疫细胞化学实验结果显示A549细胞中GSK-3β表达丰富,不同浓度的TSA对A549细胞的GSK-3β蛋白表达无明显影响(P>0.05);12.5ug/L的TSA并不影响A549细胞中pGSK-3β和p27蛋白表达情况(P>0.05),从25ug/L组起,pGSK-3β蛋白水平降低,E-cadherin蛋白和p27蛋白表达增加(P<0.05);酶抑制剂SB216763使活性受抑制形式的GSK-3β(pGSK-3β)表达增加,而下调E-cadherin和p27的蛋白水平(P<0.05)。结论1、GSK-3β参与并促进了曲古抑菌素A对肺癌A549细胞的生长抑制作用和细胞周期阻滞效应,其机制可能与GSK-3β对细胞周期素依赖性激酶抑制剂p27蛋白的调节有关。2、TSA通过增加GSK-3β活性而降低肺癌A549细胞的侵袭力,GSK-3β上调肿瘤转移抑制分子E-cadherin蛋白的表达可能是其抑制肺腺癌细胞侵袭和转移的途径之一。3、抑制GSK-3β活性的药物可能降低化疗对肺腺癌的抗癌作用,GSK-3β或许可作为肺癌治疗的一个新靶点。

全文目录

符号说明  5-7
摘要  7-10
ABSTRACT  10-16
第一部分 GSK-3Β参与抑制肺癌细胞增殖的实验研究  16-34
  前言  16
  1 材料与方法  16-27
  2 实验结果  27-31
  3 讨论  31-34
第二部分 GSK-3Β在曲古抑菌素A 抑制肺癌细胞侵袭中的作用  34-42
  前言  34
  1 材料与方法  34-36
  2 结果  36-39
  3 讨论  39-42
全文总结  42-43
参考文献  43-50
文献综述  50-57
致谢  57-58
攻读硕士学位期间发表的文章  58

GSK-3β在曲古抑菌素A诱导的细胞毒效应中的作用

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