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谷胱甘肽S-转移酶μ3对乳腺癌细胞株MDA-MB-231生物学特性的影响

作　者: 黄秋梅
导　师: 袁洪
学　校: 中南大学
专　业: 药理学
关键词: 谷胱甘肽S-转移酶μ3 乳腺癌 RNA干扰迁移生长抑制
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:研究谷胱甘肽S-转移酶μ3(glutathione S-transferase mu 3,GSTM3)在乳腺癌中的作用,建立GSTM3稳定过表达或沉默的乳腺癌细胞株MDA-MB-231,初步观察GSTM3对乳腺癌细胞株MDA-MB-231生物学特性的影响。方法:构建GSTM3真核表达重组质粒pcDNA3.1/GSTM3,并利用真核表达载体pSilencer 2.1-U6 neo构建GSTM3特异性siRNA表达质粒;以脂质体转染法将构建好的正确重组质粒和对照载体质粒分别转染MDA-MB-231细胞,RT-PCR和荧光定量PCR法检测GSTM3 mRNA水平,western blot筛选GSTM3蛋白表达改变的稳定细胞株;应用MTT法和细胞划痕运动实验,观察GSTM3对MDA-MB-231细胞体外增殖能力、迁移运动及蒽环类抗肿瘤药物阿霉素敏感性等影响。结果:1.转染GSTM3真核表达质粒,经RT-PCR、荧光实时定量PCR和western实验证明,GSTM3过表达的稳定乳腺癌细胞株MDA-MB-231成功建立。2.转染GSTM3特异性siRNA表达质粒,并经RT-PCR和荧光实时定量PCR实验证明,GSTM3表达沉默的稳定乳腺癌细胞株MDA-MB-231成功建立。3.GSTM3对MDA-MB-231细胞生物学特性的影响:①GSTM3过表达和沉默后对MDA-MB-231细胞体外增殖能力均无明显影响(P＞0.05);②划痕运动试验中,GSTM3表达沉默的MDA-MB-231细胞划痕愈合快(P＜0.05),GSTM3过表达的MDA-MB-231细胞则愈合慢(P＜0.05);③GSTM3过表达后,MDA-MB-231细胞对蒽环类抗肿瘤药物阿霉素的敏感性增加(P＜0.05),GSTM3表达沉默后,MDA-MB-231细胞对阿霉素敏感性降低(P＜0.05)。结论:1.成功构建GSTM3过表达和沉默的乳腺癌细胞株MDA-MB-231。2.GSTM3表达改变对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外增殖能力无明显影响,主要改变细胞对阿霉素的药物敏感性,并影响细胞的迁移运动能力,从而改变乳腺癌细胞转移的倾向。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
目录  8-9
英文缩略词表  9-10
前言  10-12
实验技术路线图  12-13
第一章建立GSTM3过表达的MDA-MB-231细胞株  13-25
  1 材料和方法  13-20
  2 结果  20-24
  3 小结  24-25
第二章建立GSTM3沉默的MDA-MB-231细胞株  25-33
  1 材料和方法  25-28
  2 结果  28-32
  3 小结  32-33
第三章细胞生物学特性分析  33-41
  1 材料和方法  33-35
  2 结果  35-40
  3 小结  40-41
第四章讨论  41-44
第五章结论  44-45
参考文献  45-48
论文综述  48-56
致谢  56-57
在攻读硕士学位期间的研究成果  57

谷胱甘肽S-转移酶μ3对乳腺癌细胞株MDA-MB-231生物学特性的影响

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