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变溶菌素发酵生产及在口腔制品中的应用

作　者: 曹涛
导　师: 刘同军
学　校: 山东轻工业学院
专　业: 生物化工
关键词: 变溶菌素 球孢链霉菌 变形链球菌 纯化与性质 牙膏
分类号: TQ658.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 4次
引　用: 1次
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内容摘要


本文利用添加变形链球菌（Streptococcus mutans）的双层平板,从土壤中筛选出一株产溶菌酶能力较高的链霉菌（Streptomyces sp.）G4,通对对它的形态特征,培养特征和生理生化特征进行观察并结合细胞壁成分和16SrDNA序列分析,该菌株鉴定为球孢链霉菌（Streptomyces globisporus）。对球孢链霉菌G4进行紫外诱变和EMS诱变复合处理,并结合抑菌圈大小定向筛选,得到一株产变溶菌素能力明显提高的菌株定名为球孢链霉菌G4-3,酶活较出发菌株提高了1.1倍,产酶周期缩短了1天,传代5次,仍保留90%酶活。通过单因子试验和正交试验,得到最适发酵培养基组成为:3%蔗糖,1.25%大豆蛋白胨和0.2%牛肉膏;无机盐的最适浓度为:0.6%NaCl、0.05%K2HPO4、0.1%NaH2PO4和0.01%CaCl2;最适培养条件的优化研究发现,培养时间对菌种产变溶菌素影响最大。研究变溶菌素粗酶液的基本性质得出,变溶菌素的最适作用温度和最适pH分别是55℃和6.5,在pH4.0～10之间变溶菌素比较稳定性;溶菌活性对离子强度的变化比较敏感。多数金属离子会抑制变溶菌素的活性,其中Fe2+、Cu2+、Zn2+、Pb2+几乎可以使其完全失活;各种螯合剂、碘乙酸、非离子型表面活性剂SDS等对变溶菌素有抑制作用,而离子型表面活性剂TritonX-100,Tween80等对变溶菌素有激活作用;通过比较不同细菌、酵母菌的作用效果,变溶菌素比卵清溶菌酶的溶菌谱广泛,不仅对大部分革兰氏阳性菌有较强的溶解活性,而且对部分革兰氏阴性菌也有作用,特别是对变形链球菌的表现出高活性。对变溶菌素粗酶液进行纯化,得到两种电泳纯的组分A1和A2,二者的分子量分别是14795和23780,等电点分别是9.3和9.8。最后,对变溶菌素在牙膏中的应用做了可行性分析和初步试验研究,发现牙膏中所含的离子型表面活性剂、增稠剂及粘合剂对变溶菌素发挥功能有抑制作用,但通过向其中加入非离子表面活性剂可有效的解除这种抑制。

全文目录


摘要  8-9
ABSTRACT  9-10
第1章 绪论  10-16
  1.1 微生物溶菌酶  10-12
    1.1.1 微生物溶菌酶的研究历史  10
    1.1.2 微生物溶菌酶的分类  10-11
    1.1.3 几种典型的微生物溶菌酶的研究进展  11-12
  1.2 变溶菌素  12-14
    1.2.1 变溶菌素的研究历史  12-13
    1.2.2 变溶菌素的作用机制  13-14
    1.2.3 变溶菌素的主要用途  14
  1.3 本课题的研究意义  14-16
第2章 产变溶菌素球孢链霉菌的筛选及鉴定  16-28
  2.1 材料与方法  16-21
    2.1.1 材料  16-18
    2.1.2 方法  18-21
  2.2 结果与讨论  21-27
    2.2.1 土壤样品的采集和选择  21
    2.2.2 菌株的筛选  21-22
    2.2.3 放线菌G4 发酵液溶菌活性测定  22-23
    2.2.4 G4 生长和产酶曲线  23-24
    2.2.5 菌株鉴定  24-27
  2.3 本章小结  27-28
第3章 球孢链霉菌的诱变育种  28-32
  3.1 材料与方法  28-30
    3.1.1 材料  28-29
    3.1.2 方法  29-30
  3.2 结果  30-31
    3.2.1 变溶菌素高产球孢链霉菌菌株的选育  30
    3.2.2 诱变突变株G4-3 与出发菌株G4 产变溶菌素发酵周期的比较  30-31
  3.3 本章小结  31-32
第4章 变溶菌素发酵条件的优化及粗酶液酶学性质研究  32-46
  4.1 材料与方法  32-34
    4.1.1 材料  32-33
    4.1.2 方法  33-34
  4.2 结果与讨论  34-45
    4.2.1 对培养基组成优化的单因子实验  34-35
    4.2.2 对C、N 培养基的正交实验  35-36
    4.2.3 最适培养条件优化的单因子实验  36-38
    4.2.4 培养条件优化的正交实验  38-39
    4.2.5 变溶菌素酶学性质的研究  39-45
  4.3 结论  45-46
第5章 变溶菌素的分离纯化  46-54
  5.1 材料与方法  46-49
    5.1.1 材料  46-47
    5.1.2 方法  47-49
  5.2 结果与讨论  49-53
    5.2.1 变溶菌素各组分的分离纯化  49-52
    5.2.2 组分A1、组分A2 的部分性质研究  52-53
  5.3 小结  53-54
第6章 变溶菌素在口腔制品中的应用  54-62
  6.1 材料与方法  54-55
    6.1.1 材料  54-55
    6.1.2 方法  55
  6.2 结果与讨论  55-61
    6.2.1 变溶菌素在牙膏中应用的可行性分析  55-61
  6.3 小结  61-62
第7章 总结和展望  62-63
参考文献  63-66
致谢  66-67
在学期间主要科研成果  67
  一、发表学术论文  67

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中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 香料及化妆品工业 > 化妆品 > 口腔用品
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