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柠檬提取物对变形链球菌致龋相关酶活性及代谢产物的影响

作　者: 余志芬
导　师: 张向宇
学　校: 天津医科大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: 柠檬提取物变形链球菌细胞外多糖葡糖基转移酶乳酸脱氢酶蔗糖酶
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的龋病是最常见的口腔感染性疾病之一,变形链球菌是公认的主要致龋菌。天然产物的防龋作用及机制已成为国内外防龋药物研究的热点。柠檬提取物是由水果柠檬中提取的一种淡黄色液体。前期实验表明柠檬提取物有抑制变形链球菌生长、产酸和黏附的作用,本研究通过研究柠檬提取物对变形链球菌致龋相关酶的活性及代谢产物的抑制作用,进一步探讨柠檬提取物抑制变形链球菌的附着性、代谢产酸的作用机制,同时分析代谢酶在细菌致龋作用中的意义,为今后开发天然、无毒副作用、新型的防龋制剂提供依据。方法1.柠檬提取物对变形链球菌葡糖基转移酶活性和细胞外多糖含量的影响采用二倍稀释法,用含2%蔗糖的胰蛋白酶消化大豆培养基(Trypticase Soy Broth TSB)将柠檬提取物稀释为0.313μl/ml、0.156μl/ml、0.078μl/ml和0.039μl/ml4个浓度的溶液(最小抑菌浓度为0.625μl/ml),以TSB液体培养基作为空白对照组。加入变形链球菌菌液,用Neson-Somogyi法测定培养6h、18h、24h和48h培养液中还原糖的含量,计算出酶活性；同时采用蒽酮法测定水不溶性多糖和水溶性多糖的含量,并对该酶活性和胞外多糖含量做相关性分析,以探讨柠檬提取物抑制变形链球菌附着作用机制。2.柠檬提取物对变形链球菌蔗糖酶活性的影响分组设计同上。变形链球菌中蔗糖酶可以水解蔗糖,产物葡萄糖与3,5—二硝基水杨酸反应,生成橘红色化合物,其颜色深浅与还原糖量成正比。根据此原理测定变形链球菌培养6h、18h、24h和48h培养液中葡萄糖的含量,推算出蔗糖酶活性,以研究柠檬提取物对变形链球菌利用碳水化合物能力的影响。3.柠檬提取物对变形链球菌乳酸脱氢酶活性和产酸的影响分组设计同上。采用还原性辅酶Ⅰ氧化法,测定柠檬提取物对变形链球菌乳酸脱氢酶活性的影响,同时用pH计测定用药前后培养液中pH值的变化(ΔpH),以检测柠檬提取物对变形链球菌产酸能力的抑制作用,并对该酶活性和细菌代谢产酸能力做相关性分析。结果1.随着柠檬提取物溶液浓度的升高,变形链球菌葡糖基转移酶活性和细胞外多糖含量逐渐降低,在各个时间点,除0.039μ1/ml组和0.078μ1/ml组间均数差异无统计学意义(P>0.05)外,各实验组之间及实验组与空白对照组之间酶活性、水不溶性多糖含量和水溶性多糖含量差异均有统计学意义(P<0.01)；葡糖基转移酶活性和水不溶性多糖含量之间呈正相关(r=0.825-0.963,P<0.01),葡糖基转移酶活性和水溶性多糖含量之间亦呈正相关(r=0.814-0.950,P<0.01),且葡糖基转移酶活性对两者的相关性比较有统计学意义(t=4.37,P<0.01)。(浓度组-空白对照组)酶活性、WIG含量的总体均数在6h,18h,24h和48h间比较均有统计学意义(F=19.28 F=36.16,P<0.01),(浓度组-空白对照组)WSG含量的总体均数在18h与6h、24h、48h间比较有统计学意义(F=5.15,P<0.01)。2.随着柠檬提取物溶液浓度的升高,变形链球菌蔗糖酶活性逐渐降低,在各个时间点,从0.078μl／ml组到0.313μl/m1组,各实验组均数间比较差异均有统计学意义(P<0.01),各实验组与空白对照组蔗糖酶活性比较亦有统计学差异(P<0.01)。(浓度组-空白对照组)酶活性的总体均数在18h与6h、24h、48h比较有统计学意义(F=300.78,P<0.01)。3.随着柠檬提取物溶液浓度的升高,乳酸脱氢酶活性和ΔpH逐渐降低,在各个时间点,从0.078μl/ml组到0.313μl/ml组,各实验组均数间比较有统计学意义(P<0.01),各实验组与空白对照组酶活性、ΔpH均有统计学意义(P<0.01)；乳酸脱氢酶活性和ApH值之间呈正相关(r=0.8596～0.9460,P<0.01)。(浓度组一空白对照组)乳酸脱氢酶活性和ApH的总体均数在四个时间点间比较均无统计学意义(P>0.05)。结论1.柠檬提取物对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外多糖的合成具有抑制作用,从0.078μl／ml起,随着药物浓度的升高,抑制作用增强。2.柠檬提取物可以抑制变形链球菌蔗糖酶活性,从0.078gl／ml起,随着药物浓度的升高,抑制作用增强。3.柠檬提取物可以抑制变形链球菌乳酸脱氢酶活性及影响糖代谢产酸能力,从0.078μl／ml起,随着浓度的升高,抑制作用增强。4.柠檬提取物对培养18h-24h变形链球菌的葡糖基转移酶、蔗糖酶和胞外多糖的抑制作用强于其它生长周期。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-12
缩略语  12-13
前言  13-17
  研究现状、成果  13-15
  研究目的、方法  15-17
一、柠檬提取物(LPE)对变形链球菌葡糖基转移酶活性和细胞外多糖含量的影响  17-34
  1.1 对象和方法  17-20
    1.1.1 材料与仪器  17
    1.1.2 LPE的提纯  17-18
    1.1.3 主要试剂的配制  18
    1.1.4 实验菌株及菌液制备  18
    1.1.5 LPE溶液的稀释及实验分组  18
    1.1.6 菌液培养  18
    1.1.7 葡萄糖标准曲线和葡聚糖标准曲线的测定  18-19
    1.1.8 GTF的提取和活性测定  19
    1.1.9 S.mutans胞外WIG、WSG含量的测定  19-20
    1.1.10 统计学处理  20
  1.2 结果  20-30
    1.2.1 葡萄糖标准曲线和葡聚糖标准曲线测定结果  20-21
    1.2.2 LPE溶液对S.mutans GTF活性影响的测定结果  21-24
    1.2.3 LPE溶液对S.mutans胞外WIG、WSG含量影响的测定结果  24-28
    1.2.4 LPE溶液对S.mutans GTF活性与WIG、WSG含量影响的相关性分析结果  28-30
  1.3 讨论  30-32
  1.4 小结  32-34
二、柠檬提取物对变形链球菌蔗糖酶活性的影响  34-41
  2.1 对象和方法  34-36
    2.1.1 材料与仪器  34
    2.1.2 主要试剂的配制  34-35
    2.1.3 实验菌株及菌液制备  35
    2.1.4 LPE溶液的稀释及实验分组  35
    2.1.5 菌液培养  35
    2.1.6 葡萄糖标准曲线的测定  35
    2.1.7 LPE溶液对S.mutans蔗糖酶活性影响的测定  35-36
    2.1.8 统计学处理  36
  2.2 结果  36-39
    2.2.1 葡萄糖标准曲线测定结果  36-37
    2.2.2 LPE溶液对S.mutans蔗糖酶活性影响的测定结果  37-39
  2.3 讨论  39-40
  2.4 小结  40-41
三、柠檬提取物对变形链球菌乳酸脱氢酶活性和产酸能力的影响  41-51
  3.1 对象和方法  41-43
    3.1.1 材料与仪器  41
    3.1.2 实验菌株及菌液制备  41
    3.1.3 LPE溶液的稀释及实验分组  41-42
    3.1.4 菌液培养  42
    3.1.5 LPE溶液对S.mutans乳酸脱氢酶活性影响的测定  42-43
    3.1.6 LPE溶液对S.mutans产酸能力影响的测定  43
    3.1.7 统计学处理  43
  3.2 结果  43-48
    3.2.1 LPE溶液对S.mutans LDH活性影响的测定结果  43-45
    3.2.2 LPE溶液对S.mutans产酸能力影响的测定结果  45-47
    3.2.3 LPE溶液对S.mutans LDH活性与△pH影响的相关性分析结果  47-48
  3.3 讨论  48-50
  3.4 小结  50-51
结论  51-53
参考文献  53-57
发表论文和参加科研情况说明  57-58
附录  58-59
综述  59-72
  细菌黏附的研究进展  59-67
  综述参考文献  67-72
致谢  72-73

柠檬提取物对变形链球菌致龋相关酶活性及代谢产物的影响

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