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荷叶生物碱的分析及分离纯化研究

作　者: 郑振佳
导　师: 王晓；王明林
学　校: 山东农业大学
专　业: 农产品加工及贮藏工程
关键词: 荷叶 生物碱 定性分析 分离纯化 定量分析
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


莲为多年生水生宿根草本植物,在全世界有着广泛的分布。同时,莲也是我国最具特色、栽培面积最大、品系资源最丰富的水生经济植物。荷叶是睡莲科莲属植物的叶,营养丰富且含有生物碱和黄酮等多种活性物质,是非常具有开发价值的天然植物资源。本研究通过对荷叶生物碱的分析以及分离纯化研究,为荷叶资源的进一步开发利用提供科学依据。主要研究结果如下:1.本研究利用阳离子固相萃取柱的定向吸附特性对样品进行净化,利用快速分离液相-飞行时间质谱提供的精确分子质量数,快速鉴定荷叶生物碱。样品采用1%盐酸超声提取,经固相萃取柱净化,再用氨水-甲醇进行洗脱,洗脱液浓缩后用甲醇定容。选用Welch Materials C18柱,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,在正离子模式下,经飞行时间质谱分析,分离并检测了9种生物碱。实验建立的快速分离液相-四级杆飞行时间串联质谱结合阳离子交换固相萃取柱前处理技术,可以快速准确鉴定荷叶生物碱成分。2.本研究建立了荷叶中生物碱类化合物的快速分离纯化技术。通过实验优化得到了三个荷叶生物碱分离体系,分别为:四氯化碳/氯仿/甲醇/0.1 M盐酸(1/3/3/2,V/V)常规高速逆流分离体系和石油醚/乙酸乙酯/甲醇/水(5/5/2/8,V/V)、叔丁基甲醚/甲醇/水(4/1/5,V/V)两个pH区带逆流色谱分离体系。分离得到的4个生物碱单体纯度均大于98%,且经过质谱和核磁共振对化合物进行了结构的鉴定。结果表明pH区带逆流色谱法是一种高效的分离制备荷叶生物碱的技术。3.采用超声提取-高效液相联用分析荷叶中的O-去甲荷叶碱、N-去甲荷叶碱、荷叶碱和莲碱四种主要的生物碱,为荷叶及相关产品的质量控制参考。选用Welch Materials C18色谱柱,以乙腈-水(含0.1%三乙胺)为流动相进行梯度洗脱,实现了O-去甲荷叶碱、N-去甲荷叶碱、荷叶碱和莲碱四种生物碱的同时基线分离。在0.1-50μg/mL浓度范围内,O-去甲荷叶碱(r = 0.9998)、N-去甲荷叶碱(r = 0.9999)、荷叶碱(r = 0.9998)和莲碱(r = 0.9998)具有良好的线性关系,它们的检出限分别为1.87 ng、2.22 ng、2.34 ng和1.88 ng (S/N = 3)。该方法具有良好的精密度和回收率,可用于荷叶中的生物碱的快速测定。

全文目录


摘要  7-8
ABSTRACT  8-9
1 前言  9-23
  1.1 荷叶的研究进展  9-14
    1.1.1 荷叶资源的开发现状  9-11
    1.1.2 荷叶的生理功效  11-12
    1.1.3 荷叶的化学成分研究  12-14
  1.2 荷叶生物碱的提取、分析、分离纯化方法研究进展  14-22
    1.2.1 荷叶生物碱的提取方法  14-17
    1.2.2 荷叶生物碱的分析方法  17-19
    1.2.3 荷叶生物碱的分离纯化方法  19-22
  1.3 本研究的目的、内容及意义  22-23
    1.3.1 研究目的  22
    1.3.2 研究内容  22
    1.3.3 研究意义  22-23
2 材料与方法  23-27
  2.1 实验材料  23
  2.2 主要试剂  23
  2.3 仪器设备  23-24
  2.4 实验方法  24-27
    2.4.1 荷叶生物碱的定性分析  24-25
    2.4.2 荷叶生物碱的分离纯化  25-27
    2.4.3 荷叶生物碱的定量分析  27
3 结果与分析  27-45
  3.1 荷叶生物碱的定性分析  27-30
    3.1.1 固相萃取柱的选择  27-28
    3.1.2 荷叶生物碱的鉴定  28-30
  3.2 荷叶生物碱的分离纯化  30-40
    3.2.1 荷叶商品提取物分离纯化体系的建立  30-33
    3.2.2 纯度分析和结构鉴定  33-37
    3.2.3 pH 区带逆流色谱法与传统柱色谱法的对比  37-38
    3.2.4 荷叶提取物中生物碱的分离与纯化  38-40
  3.3 荷叶生物碱的定量分析  40-45
    3.3.1 检测波长的选择  40-41
    3.3.2 提取条件的优化  41-43
    3.3.3 高效液相色谱条件的优化  43
    3.3.4 线性关系与检出限  43-44
    3.3.5 精密度和回收率  44
    3.3.6 样品测定  44-45
4. 讨论  45-46
  4.1 荷叶生物碱的定性分析  45
  4.2 荷叶生物碱的分离纯化  45
  4.3 荷叶生物碱的定量分析  45-46
5. 结论与展望  46-48
  5.1 荷叶生物碱的定性分析  46
  5.2 荷叶生物碱的分离纯化  46
  5.3 荷叶生物碱的定量分析  46-47
  5.4 进一步研究方向  47-48
参考文献  48-56
附录  56-63
致谢  63-64
攻读学位期间发表论文目录  64

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
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