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沙冬青低温诱导基因内含子与AmCIP启动子的克隆及功能分析

作　者: 陈县明
导　师: 卢存福
学　校: 北京林业大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 沙冬青 AmCIP AmLEA AmPI 内含子 启动子
分类号: S793.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 65次
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内容摘要


沙冬青是我国西北荒漠地区的常绿阔叶灌木,具有极强的抗寒性,可在冬季-30℃甚至更低的温度下生存,是理想的研究抗寒性的材料,目前对沙冬青的研究多集中在生理生化方面而分子方面的研究较少。我们曾在低温诱导的沙冬青幼苗中克隆获得三个基因AmCIP AmLEA和Am PI,转化大肠杆菌的原核表达分析发现增强了大肠杆菌的耐热性和抗寒性。本研究在以前的工作基础上,进行了深入研究,第一部分是AmCIP AmLEA和AmPI内含子的克隆。根据已知的cDNA序列设计引物,由PCR反应获得,经测序结果与cDNA比对发现AmCIP和AmLEA内含子不具有GT-AG规则的保守序列并富含AU,其剪切位点为CA-AA和AG-GC,推测其可能为一新的剪切方式。第二部分是AmCIP基因启动子的克隆和分析。该启动子由Genome Walking方法获得,序列分析发现至少包括5个顺式作用元件DRE、ABRE、repeat A和repeat D,另外一个元件其序列(TAACCA)为MYB(TGGTTAG)互补序列,推测其可能也为一MYB位点。为了分析该启动子功能,我们把它与GFP和GUS两个报告基因连接在同一个载体上,通过农杆菌介导转化烟草。

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中图分类: > 农业科学 > 林业 > 森林树种 > 阔叶灌木 > 其他
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