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珍珠母炮制前后寡肽的分离纯化与活性对比研究

作　者: 李梅
导　师: 张辉
学　校: 长春中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 珍珠母化学成分抗氧化活性寡肽
分类号: R283
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

珍珠母为蚌科动物三角帆蚌Hyriopsis cumingii(Lea)、褶纹冠蚌Cristaria plicata(Leach)或珍珠贝科动物马氏珍珠贝Pteria martensii(Dunker)的贝壳,为我国传统中药收载于各版药典,具有平肝潜阳,定惊明目的作用,用于头痛眩晕,烦躁失眠,肝热目赤,肝虚目昏。本实验对珍珠母生品、超微粉和炮制品三种样品进行了回流法提取。通过溶出率的比较发现,超微粉的溶出率高于生品,炮制品的溶出率高于生品,即珍珠母的粉碎度越大,溶出率越高,珍珠母炮制后,溶出率增大,故我们最后选定珍珠母经超微粉的生品和炮制品作为实验材料。采用羟基自由基清除法对珍珠母生品和炮制品总肽类化学成分的抗氧化活性进行研究。结果表明:珍珠母生品和炮制品均具有一定的抗氧化活性,但珍珠母炮制品的抗氧化能力明显强于生品,是生品抗氧化能力的七倍,为进一步明确其抗氧化活性的物质基础提供了依据,并为今后进一步开发利用珍珠母资源指明了方向。采用双缩脲法和苯酚-浓硫酸法对珍珠母生品和炮制品中总肽含量和糖含量进行了测定。结果表明:珍珠母生品中总肽含量为0.0895%,糖含量为0.000478%;珍珠母炮制品总肽含量为0.085%,糖含量为0.0001088%。珍珠母中肽类化学成分在热炮制条件下的变化,符合肽键热震荡理论,为现代的热震荡理论提供了依据。同时,糖含量的变化表明:具有强吸电能力的酸酐基团O-糖苷键的稳定性弱于N-糖苷键和肽键,故较肽键易断裂。通过对珍珠母生品冻干粉反复的柱层析分离纯化及高效液相的进一步纯化得到1个单体寡肽化合物。应用现代质谱技术和肽键的裂解规律对其结构进行推断,是分子量为302的三肽化合物,命名为Op-3。这是首次从珍珠母中分离得到的。采用液质联用技术对珍珠母生品和炮制品中的寡肽类化学成分进行了分析,初步推测了4个寡肽化合物的结构,分别为m/z218的二肽;m/z232的二肽;m/z为303的三肽;m/z为374的四肽。这些化合物均首次在珍珠母中被指认。

全文目录

中文摘要  6-7
英文摘要  7-9
英文缩略语  9-10
前言  10-12
第一章珍珠母化学成分及药理作用研究概况  12-24
  一珍珠母化学成分的研究  12-13
  二珍珠母药理作用的研究  13
  三珍珠母临床作用的研究  13-15
  四珍珠母炮制方法的研究  15-17
  五珍珠母在处方中的应用  17-18
  六珍珠母中水溶性成分的提取  18
  七珍珠母中化学成分的含量测定  18-21
  八珍珠母的活性研究  21-22
  九前景展望  22-24
第二章肽类化合物的研究进展  24-29
  一肽类化合物分离方法的研究进展  24-26
  二肽类化合物分析方法的研究进展  26-27
  三肽类化合物药物的研究  27-29
第三章珍珠母中寡肽类化学成分的检测  29-34
  一珍珠母中寡肽类化学成分薄层层析的检测  29-31
  二珍珠母中寡肽类化学成分双缩脲反应的检测  31-32
  三珍珠母中寡肽类化学成分酸水解产物的检测  32-34
第四章珍珠母中寡肽类化学成分的分离纯化及鉴定  34-46
  一珍珠母中寡肽类化学成分的提取  34-37
  二珍珠母寡肽类化学成分的分离、纯化  37-41
  三珍珠母寡肽Op-3 的结构鉴定  41-46
第五章珍珠母炮制前后总肽类化学成分的抗氧化活性对比研究  46-55
  一珍珠母总肽类化学成分的抗氧化活性研究  46-50
  二珍珠母生品和炮制品总肽和总糖类化学成分含量的测定  50-55
第六章珍珠母炮制前后寡肽类化学成分 HPLC-MS(n)  55-67
  一珍珠母生品中寡肽类化学成分的 LC-MS~(n)分析  55-60
  二珍珠母炮制品中寡肽类化学成分的 LC-MS~(n)分析  60-67
总结  67-69
致谢  69-70
参考文献  70-74

珍珠母炮制前后寡肽的分离纯化与活性对比研究

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