学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓细胞PIG-A基因突变形式及EGR-1、WT1基因表达水平研究

作　者: 李丽燕
导　师: 付蓉；邵宗鸿
学　校: 天津医科大学
专　业: 内科学
关键词: 阵发性睡眠性血红蛋白尿 PIG-A基因突变 WT1基因 EGR-1基因
分类号: R55
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 24次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的：了解阵发性睡眠性血红蛋白尿症(Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)患者PIG-A基因突变形式及EGR-1基因(early growth response gene)、WT1基因(Wilms’ tumor gene) mRNA表达水平,探讨中国PNH患者PIG-A基因突变特点及PNH克隆获得增殖优势的机制。方法：研究对象为20例,其中PNH患者16例,AA-PNH综合征患者4例,正常对照10例。采用流式细胞术(FCM)检测PNH患者及AA-PNH综合征患者外周血及骨髓CD55-及CD59-细胞的比例,并分选出CD59-的骨髓单个核细胞(BMMNCS)。应用DNA测序法检测PIG-A基因突变的形式；RT-PCR方法检测CD59+ BMMNC及CD59- BMMNC WT1基因及EGR-1基因mRNA的表达水平。结果：1.对16例PNH患者中的9例和4例AA-PNH患者中的1例进行了BMMNCPIG-A基因突变形式的检测,共发现了5种突变形式,均为碱基置换,包括鸟嘌呤替代腺嘌呤,胸腺嘧啶替代鸟嘌呤,胸腺嘧啶替代腺嘌呤,鸟嘌呤替代胸腺嘧啶,胞嘧啶替代鸟嘌呤,其中1例为同义突变,余为错义突变。其中有3例PNH患者同时存在2个以上的点突变,未发现插入或者缺失突变形式。对上述结果进行了突变形式的阳性率分析,G替代A的阳性率为30.0%(3/10),T替代G的阳性率为20.0%(2/10),T替代A的阳性率为10.0%(1/10),G替代T的阳性率为10.0%(1/10),C替代G的阳性率为10.0%(1/10)。我们所研究的10例患者,BMMNC PIG-A基因有突变患者的CD59-细胞数量高于没有突变者,且突变形式为G替代A的CD59-细胞数量高于其他突变的形式。2.PNH及AA-PNH患者CD59-细胞组、CD59+细胞组及正常对照组EGR-1mRNA的相对表达量分别为(1.00±0.11)、(0.86±0.14)和(0.85±0.06),CD59-细胞组明显高于CD59+细胞组和正常对照组(p均<0.05),而CD59+细胞组和正常对照组比较差异无统计学意义(p>0.05)；PNH及AA-PNH患者CD59-细胞组、CD59+细胞组及正常对照组WT1 mRNA的相对表达量分别为(1.06±0.16)、(0.90±0.14)和(0.85±0.06),CD59-细胞组明显高于CD59+细胞组和正常对照组(p均<0.05),而CD59+细胞组和正常对照组比较差异无统计学意义(p>0.05)。EGR-1、WT1mRNA的相对表达量与CD59-细胞数量均呈正相关关系(相关系数分别为0.509、0.481,p均<0.05),而与CD59+细胞数量无明显相关性。结论：我们观察到的这部分中国PNH患者PIG-A基因突变主要表现为单个碱基的置换,且随机分布于基因的编码区,没有突变热点及丛集现象,PNH克隆EGR-1基因和WT1基因过表达对其取得增殖优势可能起到促进作用。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-10
符号说明  10-14
前言  14-18
  研究现状、成果  14-17
  研究目的、方法  17-18
一、PNH患者PIG-A基因突变的检测  18-29
  1.1 对象和方法  19-23
    1.1.1 病例和对照  19
    1.1.2 主要试剂与材料  19-20
    1.1.3 主要仪器设备  20
    1.1.4 实验方法  20-23
  1.2 结果  23-27
    1.2.1 突变形式分析  23
    1.2.2 突变形式与CD59-细胞数量的相关分析  23-27
  1.3 讨论  27-28
  1.4 小结  28-29
二、PNH患者EGR-1基因和WT1基因mRNA表达  29-45
  2.1 对象和方法  29-35
    2.1.1 病例和对照  29-30
    2.1.2 主要试剂与材料  30-31
    2.1.3 主要仪器设备  31
    2.1.4 实验方法  31-35
  2.2 结果  35-41
    2.2.1 CD59-细胞的分选结果  35-36
    2.2.2 BMMNC EGR-1、WT1mRNA表达  36-39
    2.2.3 BMMNC EGR-1、WT1mRNA表达水平与临床特征相关性分析  39-41
  2.3 讨论  41-44
  2.4 小结  44-45
结论  45-46
参考文献  46-52
发表论文和参加科研情况说明  52-53
综述  53-63
  阵发性睡眠性血红蛋白尿症二次基因突变研究进展  53-60
  综述参考文献  60-63
致谢  63-64
附发表文章  64-69

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓细胞PIG-A基因突变形式及EGR-1、WT1基因表达水平研究

内容摘要

全文目录

相似论文