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已烯雌酚对小鼠睾丸引带组织中AR、ERα、Actal和PCNA mRNA表达的影响

作　者: 杜源生
导　师: 蒋学武
学　校: 汕头大学
专　业: 小儿外科
关键词: 己烯雌酚 剂量效应 睾丸引带 雌激素受体 雄激素受体 核增殖抗原 肌动蛋白 内分泌干扰物
分类号: R114
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:流行病学发现,近半个世纪以来,人类隐睾等雄性生殖系统畸形的发生率日趋增加,且与胎儿期母体内分泌干扰物(endocrine disruptors,EDs)暴露有关。但其确切作用机制依然很不清楚。新近研究发现,雄性生殖系统中普遍存在雌激素受体(estrogen receptor,ER)的表达,EDs可能直接通过ER对雄性生殖器官产生不利影响,但也有研究显示ERα基因敲除小鼠睾丸大多不能正常下降,提示一定剂量雌激素可能是睾丸引带正常发育所必须的。本研究采用公认的代表性EDs己烯雌酚(diaethylstilbestrol,DES)作用于孕期母鼠,检测不同剂量暴露对新生小鼠睾丸引带雄激素受体(androgen receptor,AR)、雌激素受体α(estrogen receptor,ERα)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和肌动蛋白α1(actin alpha 1,Acta1)mRNA表达的影响,以探讨不同剂量EDs对睾丸引带的发育和功能的影响及其可能的作用机理。材料和方法:SPF级8~10周龄雌性昆明小鼠140只,随机分为7组,每组20只,组别为:正常组、对照组、实验组1、实验组2、实验组3、实验组4、实验组5。实验组1、2、3、4、5分别给予DES 0.02μg/kg·d、DES 0.1μg/kg·d、DES 0.5μg/kg·d、DES 10μg/kg·d,DES 50μg/kg·d,DES以二甲基亚砜(dimethyl sulphoxide,DMSO)为溶剂;对照组仅给予DMSO;正常组不给任何药物。每天下午6时,按雌雄比例2:1合笼,次日早晨8时检查雌鼠有无出现阴栓(vaginal plug),以出现阴栓作为受孕标志,发现阴栓当天定为妊娠第0天,记为GD0(gestation day,GD)。雌鼠受孕后即单独饲养于一鼠笼中。GD9至GD17上午8时皮下注射给药,每次每只小鼠所用的DES均溶于0.2ml DMSO后溶于NS中。仔鼠出生后第一天,每窝雄性仔鼠<5只者予淘汰,保留仔鼠中每剂量组随机挑选6窝,每窝随机挑选5只雄性仔鼠,脱颈椎处死仔鼠,显微解剖收获得睾丸引带。用Trizol法提取总RNA,琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法鉴定RNA完整性及纯度。DNase处理RNA样本,然后行逆转录法合成第一链cDNA。行普通PCR法鉴定睾丸引带中存在AR、ERα、PCNA和Acta1基因mRNA表达,运用TaqMan探针技术行实时荧光定量PCR,检测不同剂量DES染毒后AR、ERα、PCNA和Acta1 mRNA表达量的变化。结果:1.正常新生昆明小鼠睾丸引带中存在ERα、AR、PCNA及Acta1 mRNA的表达。2.胚胎期不同剂量DES染毒对新生小鼠睾丸引带ERαmRNA表达的影响不同。低剂量组( 0.02、0.1μg/kg·d)中ERαmRNA表达量快速上升(P<0.01),DES到达0.5μg/kg·d后ERαmRNA表达量上升不明显,在高剂量组中出现一定的减少(P<0.05)。3.胚胎期不同剂量DES染毒对新生小鼠睾丸引带AR mRNA的表达存在抑制作用,低剂量组( 0.02、0.1μg/kg·d)中AR mRNA表达量轻微下降(P<0.05),DES到达0.5μg/kg.d后AR mRNA表达量快速下降(P<0.01)。4.胚胎期不同剂量DES染毒对新生小鼠睾丸引带Acta1 mRNA表达的影响不同。在低剂量组(0.1μg/kg·d)中Acta1 mRNA表达量轻微上升(P<0.05),DES到达0.5μg/kg·d后Acta1 mRNA表达量快速下降(P<0.01)。5.胚胎期不同剂量DES染毒对新生小鼠睾丸引带PCNA mRNA表达的影响不同。在低剂量组(0.1μg/kg·d)中PCNA mRNA表达量轻微上升(P<0.05);DES到达0.5μg/kg·d后AR mRNA表达量快速下降(P<0.01)。6.经相关性分析,不同剂量DES影响下AR、PCNA及Acta1 mRNA表达的改变有高度相关性(P<0.01),且为正相关;ERαmRNA表达与AR、PCNA及Acta1 mRNA表达不存在统计学相关性。结论:1.正常新生昆明小鼠睾丸引带中存在ERα、AR、PCNA及Acta1 mRNA的表达。2.胚胎期不同剂量DES染毒对小鼠睾丸引带中ERα、AR、PCNA及Acta1 mRNA表达的影响不同。适当剂量雌激素对睾丸引带发育及功能可能是有益的,也有可能是一种代偿反应,有必要进一步研究不同剂量下相应蛋白的表达情况。高剂量DES对睾丸引带存在毒性抑制作用,明显抑制AR、PCNA及Acta1 mRNA表达。3.不同剂量DES影响下AR、PCNA及Acta1 mRNA表达的改变有明显正相关;ERαmRNA表达与AR、PCNA及Acta1 mRNA表达不存在统计学相关性。这提示雄激素与睾丸引带正常发育及功能的关系比雌激素更为密切。4.本实验中采用的微量RNA提取方法可以比较有效的从睾丸引带组织中提取总RNA。

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中图分类: > 医药、卫生 > 预防医学、卫生学 > 卫生基础科学 > 卫生毒理
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