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利用微卫星标记对中国恒河猴MHC基因遗传同质性分群的研究

作　者: 闫熙
导　师: 魏强；李万波；张连峰
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 动物学
关键词: 恒河猴组织相容性复合体微卫星遗传标记
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

恒河猴是医学生物学研究中重要的非人灵长类模式动物,广泛应用于传染性疾病模型制作、疫苗开发、干细胞研究以及器官移植,尤其在模拟艾滋病感染人体的实验中,是不可代替的猴艾滋病模型。由于恒河猴地理分布广泛,而且驯化程度有限、无法建立近交系,所以在同一个实验分组中参与实验的恒河猴个体往往是遗传背景异质性,但是医学实验中需要参与实验的动物尽量保持遗传背景的同质性从而使实验结果便于分析,这样的客观矛盾导致实验中往往会出现个体差异。相同地理来源的恒河猴往往由于地理隔离,个体差异比较小,而主要组织相容性复合物分子是免疫遗传学中最重要的基因,所以选取相同地域来源和相同主要组织相容性复合物分子基因型的恒河猴实验动物参与实验将有利于缩小个体差异。本文试图根据已知地域性微卫星遗传标记与特定MHC基因高度连锁的微卫星遗传标记,建立一套恒河猴免疫遗传学同质性分类方法。实验结果表明,中国恒河猴的遗传背景复杂,地理来源遗传标记需要进一步完善。特定MHC基因高度连锁的微卫星遗传标记则可以替代连锁的MHC基因,将恒河猴区分为若干个不同的群体。本方法的建立和进一步完善,在对中国恒河猴遗传背景缺乏详细了解的情况下,将为中国恒河猴参与实验分组提供参考,也可以指导恒河猴繁育管理,长远可用于对相对封闭地区中国恒河猴进行遗传调查并逐步建立遗传同质性群体。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-6
前言  6-15
材料与方法  15-31
  一、实验材料  15-17
    1.研究对象  15
    2.质粒  15
    3.主要化学试剂、试剂盒及应用软件  15-16
    4.主要仪器  16
    5.主要试剂的配制  16-17
  二、实验方法  17-31
    1.恒河猴采血  17-18
    2.恒河猴基因组DNA的提取  18-19
    3.4bp LANDDER MARKER的设计  19-24
    4.恒河猴微卫星位点的选取和引物的设计  24-28
    5.琼脂糖凝胶电泳  28
    6.微卫星PCR扩增产物的变性聚丙烯酰氨凝胶电泳分型  28-31
实验结果  31-50
  一、基因组DNA提取结果和PCR结果  31-36
    1.基因组提取结果:53份恒河猴样本DNA提取产物取1μL0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,电泳图显示提取DNA片段大于15000bp。  31
    2.不同微卫星位点PCR结果:对5个STR检测位点D18S537,D1S548,DXS2506,H11-9268,DRA-CA的PCR产物进行2%琼脂糖凝胶电泳检测,电泳图显示,除个别位点外,均显示可以检测到扩增产物,条带大小在200bp左右,符合预期,结果如同所示。  31-35
    3.未扩增出的以及在变性聚丙烯酰氨凝胶电泳无法区分的样本重新PCR结果  35-36
  二、微卫星条带的变性聚丙烯酰氨凝胶电泳与统计  36-46
    1.变性聚丙烯酰氨凝胶电泳结果:对5个微卫星位点的扩增条带银染清晰可见,条带均处于4bp LANDDER MARKER观测范围内,结果如图所示。  36-43
    2.统计结果  43-44
    3.微卫星位点基因频率  44-46
  三、同质性分群的结果  46-50
    1.以地理来源分组  46-47
    2.DRA-CA同质性分组  47-48
    3.H11-9268同质性分组  48-49
    4.包含DRA-CA和H11-9268两个基因座相同等位基因的个体分组(无法确认连锁)  49-50
讨论  50-61
参考文献  61-64
附录缩略语表  64-66
致谢  66-68

利用微卫星标记对中国恒河猴MHC基因遗传同质性分群的研究

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