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人睾丸特异性基因TDRG1在恒河猴中同源序列的生物信息学分析及实验验证

作　者: 陈厚仰
导　师: 汤育新
学　校: 中南大学
专　业: 外科学
关键词: 睾丸基因 TDRG1 同源序列恒河猴
分类号: R-332
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：克隆人睾丸特异基因TDRG1在恒河猴中的同源基因序列,分析该基因在恒河猴多种组织中的表达谱,为深入研究TDRG1基因功能寻找动物模型。方法：以人TDRG1基因全长序列作为查询序列,利用BLASTN软件检索恒河猴基因组数据库,查询到的同源序列,运用RT-PCR、Northern blot、Real-time、免疫组化等实验初探TDRG1同源基因在恒河猴睾丸组织中以及在恒河猴全身多组织中的表达。结果：生物信息学分析表明恒河猴基因组中检索到与TDRG1同源序列,同源性达94%。RT-PCR验证了恒河猴睾丸中的同源序列；Northern Blot分析了TDRG1在恒河猴组织中同源基因表达的表达谱,结果显示只在恒河猴睾丸组织表达阳性,其余组织表达阴性；Real-time PCR结果提示TDRG1在恒河猴睾丸中同源基因有表达,但在恒河猴肾脏、膀胱、肝脏等组织中无表达；免疫组化结果显示抗人TDRG1单克隆抗体能特异结合恒河猴睾丸中的同源蛋白,而在其他组织中无TDRG1同源蛋白的表达。结论：TDRG1基因在恒河猴睾丸中有同源基因表达,为今后建立转基因或基因敲除动物模型提供了理论和实验依据。

全文目录

摘要  4-5
英文摘要  5-7
目录  7-9
英文缩略词简表  9-11
前言  11-13
第一章材料与方法  13-29
  1.1 材料  13-15
    1.1.1 组织来源  13
    1.1.2 试剂和耗材  13-14
    1.1.3 主要仪器  14-15
  1.2 方法  15-29
    1.2.1 生物信息学分析  15-16
    1.2.2 总RNA抽提  16-18
    1.2.3.RT-PCR实验验证  18-20
    1.2.4 多组织表达分析  20-29
      1.2.4.1 Northern Blot验证  20-24
      1.2.4.2 Real-time PCR检测  24-26
      1.2.4.3 免疫组织化学验证  26-29
第二章结果  29-44
  2.1 生物信息学分析TDRG1在恒河猴基因组中的同源序列  29-32
  2.2 成熟恒河猴睾丸组织总RNA的提取  32-33
  2.3 RT-PCR钓取TDRG1在恒河猴睾丸组织中同源序列  33-36
  2.4.Northern Blot检测TDRG1在恒河猴组织中同源基因的表达谱  36
  2.5.实时荧光定量PCR检测TDRG1在恒河猴中同源基因的表达  36-40
    2.5.1 实时荧光定量PCR检测TDRG1在恒河猴睾丸组织中的表达水平  36-38
    2.5.2 实时荧光定量PCR检测TDRG1在恒河猴全身多组织中的表达水平  38-40
  2.6.成熟恒河猴全身多组织免疫组化验证  40-44
第三章讨论  44-49
第四章结论  49-50
参考文献  50-56
附录  56-57
综述  57-76
致谢  76-77
攻读学位期间发表的学术论文  77

人睾丸特异性基因TDRG1在恒河猴中同源序列的生物信息学分析及实验验证

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