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人参皂苷Rg1通过激活ER及IGF-IR信号通路对抗β-淀粉样蛋白的神经毒性

作　者: 周丽苹
导　师: 陈文芳
学　校: 青岛大学
专　业: 生理学
关键词: 阿尔茨海默病 β-淀粉样蛋白 雌激素受体 胰岛素样生长因子Ⅰ受体 PC12细胞
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


为探讨人参皂苷Rg1 (ginsenoside Rg1)抗p-淀粉样蛋白(β-amyloid peptide25-35,Aβ25-35)毒性作用的分子机制,本研究应用Aβ25-35诱导PC12细胞损伤,采用MTT、real time RT-PCR、flow cytometry、western blot及瞬时转染等多种实验方法,观察Rg1对PC12细胞的保护作用及雌激素受体(estrogen receptor, ER)拮抗剂ICI182,780或胰岛素样生长因子I受体(insulin-like growth factorⅠreceptor, IGF-IR)拮抗剂JB-1的阻断效应。侧脑室注射Aβ25-35,损伤小鼠海马神经元,采用Morris水迷宫、RT-PCR等方法,观察Rg1对小鼠空间学习记忆能力的改善作用,以及ICI182,780或JB-1的阻断效应。实验结果如下：1.Aβ25-35可剂量依赖式降低PC12细胞的存活率(P<0.01)；Rg1可减弱Aβ25-35对PC12的毒性作用(P<0.05)；此作用可分别被ICll82,780或JB-1所阻断(P<0.05)。2.Aβ25-35可明显降低Bcl-2/Bax的基因表达(P<0.001),Rg1预保护可逆转Aβ25-35的损伤作用(P<0.05)。3.Aβ25-35可明显降低PC12细胞的线粒体膜电位(P<0.001),而Rg1可明显逆转上述改变(P<0.001)；此作用可分别被IClI82,780或JB-1所阻断(P<0.001)。4.Rg1可时间依赖式的增加MEK的磷酸化活性(P<0.05)。5.Rg1可明显升高雌激素反应元件(estrogen responsive elements, ERE)启动子的荧光活性(P<0.05)。6.Aβ25-35可导致小鼠的空间学习能力和记忆能力减退(P<0.05),Rg1预保护可明显对抗Aβ25-35的损伤(P<0.001)；此保护作用可被ICI182,780或JB-1所阻断(P<0.001)。7.Aβ25-35可明显降低小鼠海马组织中Bcl-2基因的表达(P<0.01),增加Bax基因的表达(P<0.01),Rg1可明显逆转上述改变(P<0.001,P<0.05)；ICI182,780或JB-1可以阻断Rg1对Bc1-2基因表达的改善作用(P<0.01,P<0.001),但对Bax的基因表达没有明显的影响。上述结果表明Rg1可明显对抗Aβ25-35对PC12细胞和小鼠海马神经元的损伤,改善小鼠空间学习记忆能力,该作用可能是通过激活ER及IGF-IR信号通路来实现的。本研究为临床防治阿尔茨海默病的新药研制提供了有力的理论和实验依据。

全文目录


中文摘要  2-4
英文摘要  4-9
引言  9-11
第一章 人参皂苷Rg1对PC12细胞的保护作用及其机制  11-21
  1 实验材料  11-12
    1.1 PC12细胞  11
    1.2 实验试剂  11
    1.3 实验仪器  11-12
  2 实验方法  12-21
    2.1 PC12细胞培养  12
    2.2 MTT法检测细胞活力  12-13
    2.3 Real Time RT-PCR检测Bcl-2、Bax基因表达  13-15
    2.4 流式细胞仪检测PC12细胞线粒体膜电位的变化  15-16
    2.5 Western blot观察Rg1对磷酸化MEK的影响  16-19
    2.6 Rg1对ERE启动子活性的影响  19-20
    2.7 统计学分析  20-21
第二章 人参皂苷Rg1对海马神经元的保护作用及其机制研究  21-25
  1 实验材料  21-22
    1.1 实验动物  21
    1.2 实验试剂  21
    1.3 实验仪器  21-22
  2 实验方法  22-25
    2.1 小鼠模型的制备  22-23
    2.2 Morris水迷宫  23
    2.3 RT-PCR检测Bcl-2及Bax基因表达  23-24
    2.4 统计方法  24-25
第三章 实验结果  25-32
  3.1 不同浓度Aβ_(25-35)对PC12细胞存活率的影响  25
  3.2 不同浓度人参皂苷Rg1对PC12细胞的保护作用  25-26
  3.3 不同浓度Rg1对Aβ_(25-35)诱导的Bcl-2/Bax基因表达的影响  26
  3.4 ICI182,780及JB-1可以阻断Rg1对PC12细胞存活率的影响  26-27
  3.5 Rg对Aβ_(25-35)诱导的细胞线粒体膜电位的影响及IC1182,780和JB-1的阻断作用  27-28
  3.6 Rg1对PC12细胞磷酸化MEK的影响  28
  3.7 Rg1对PC12细胞ERE启动子活性的影响  28
  3.8 Rg1对Aβ_(25-35)诱导的小鼠空间学习能力的影响以及ICI182,780和JB-1的阻断作用  28-29
  3.9 Rg1对Aβ_(25-35)诱导的小鼠空间记忆能力的影响以及ICI182,780和JB-1的阻断作用  29-30
  3.10 Rg1对Aβ_(25-35)诱导的小鼠海马Bcl-2和Bax基因表达的影响以及ICI182,780和JB-1 #1的阻断作用  30-32
第四章 讨论  32-35
结论  35-36
参考文献  36-39
附图  39-52
综述  52-66
  综述的参考文献  59-66
附录  66-69
攻读学位期间发表的论文、参加的会议和参与的课题情况  69-70
致谢  70-71

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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