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胰脏综合利用之：单组分猪胰岛素的分离纯化

作　者: 宋爽
导　师: 张景海
学　校: 沈阳药科大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 胰脏单组分胰岛素分离纯化综合利用
分类号: R914
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

我国从猪胰脏中提取的生化药物主要是胰岛素，在现有的生产工艺下，使胰脏中很多其他酶活性丧失，提取后的残渣只能弃之不用，造成了资源上的浪费。本文工作欲寻找一种提取胰岛素的条件，使所剩残渣可以继续提取分离出多种药用活性酶，在保证胰岛素的质量和收率的前提下，实现胰脏的综合利用。首先考察了在不影响其他酶活性的前提下，提取胰岛素的工艺条件，主要包括四方面因素：提取液因素Ⅰ、提取液因素Ⅱ、提取时间和提取次数。通过实验优化，最后确定因素Ⅰ在C、因素Ⅱ在b、提取两小时并且提取两次，提取得到的胰岛素含量最多。此外，温度也对胰岛素的提取有一定的影响，故选用在冰浴条件下提取，以使一些蛋白水解酶处于无活性状态。在对胰岛素分离纯化过程中，本实验没有采用传统工艺中减压浓缩和盐析的方法，采用的是柱层析Ⅰ方法，柱层析Ⅰ不仅能够分离纯化胰岛素，同时还能除去胰岛素提取液中的脂肪和色素，使洗脱峰变得澄清，这为下一步精细纯化提供方便。单组分胰岛素的纯化，首先采用的是柱层析Ⅱ方法，通过一步柱层析，使胰岛素的纯度达到95％以上；而后采用柱层析Ⅲ方法，使胰岛素的纯度达到99％以上。制得单组分胰岛素通过SDS—PAGE和NATIVE-PAGE电泳检测达到电泳纯，凝胶过滤柱层析检测大分子杂蛋白含量不超过胰岛素主峰的1％，符合药典要求。通过蛋白含量测定得出，每1kg胰脏最后可得到胰岛素7.46mg，与传统方法相比，产量提高了近一倍。用HPLC鉴定胰岛素，制备得到的胰岛素与胰岛素标准品出峰时间一致，纯度达到99％以上。用小鼠惊厥法测定制备胰岛素活性，在规定的给药剂量下，能够引起小鼠惊厥现象产生，符合药典标准。

全文目录

中文摘要  9-10
Abstract  10-11
第一章前言  11-20
  1. 糖尿病及其治疗  11
  2. 胰岛素简介  11-16
    2.1 胰岛素的结构  11-12
    2.2 胰岛素的分类  12-16
  3. 胰岛素市场  16-17
  4. 基因工程胰岛素  17-18
    4.1 大肠杆菌表达系统  17-18
    4.2 酵母表达系统  18
  5. 立题依据及目的  18-20
第二章胰岛素提取条件的考察  20-27
  1. 实验材料  20-21
  2. 实验方法  21-22
  3. 实验结果  22-25
    3.1 因素Ⅰ的考察  22-23
    3.2 因素Ⅱ的考察  23-24
    3.3 提取次数的考察  24-25
    3.4 提取时间的考察  25
  4. 小结  25
  5. 讨论  25-27
第三章胰岛素的分离纯化  27-43
  1. 实验材料  27
  2. 实验方法  27-31
  3. 检测方法  31-32
    3.1 HPLC鉴定猪胰岛素  31
    3.2 大分子蛋白检测  31-32
    3.3 纯度检测  32
    3.4 活性检测  32
  4. 实验结果  32-40
    4.1 柱层析Ⅰ  32-34
    4.2 柱层析Ⅱ  34-35
    4.3 柱层析Ⅲ  35-37
    4.4 产量计算  37
    4.5 HPLC鉴定猪胰岛素  37-39
    4.6 活性测定  39-40
  5. 小结  40
  6. 讨论  40-43
结论  43-44
参考文献  44-46
致谢  46

胰脏综合利用之：单组分猪胰岛素的分离纯化

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