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脾切除对门静脉高压大鼠种植性肝肿瘤的影响

作　者: 范鲁峰
导　师: 杨广顺
学　校: 第二军医大学
专　业: 外科学
关键词: 脾切除术门静脉高压肝肿瘤免疫
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

研究背景和目的肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC,以下简称肝癌）是全球最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在恶性肿瘤中占第五位，致死率居第三位。80-90%的肝癌由肝硬化发展而来。肝硬化仍然是目前为止引起门静脉高压最常见的病因。肝癌的治疗方法有很多，包括肝切除、肝移植、肝动脉化疗栓塞、射频消融、放射治疗、生物治疗、中医中药治疗以及综合治疗等。对于肝功能良好的单发肝癌，肝切除仍是治疗首选。曾有文献报道合并有肝硬化的肝癌患者行肝切除术后3年及5年生存率分别为35-62%、17-50%。在我国85-90％的肝癌患者合并不同程度的肝硬化，其中约30％合并脾功能亢进，肝癌合并脾功能亢进传统上视为手术禁忌证，但随着外科手术水平的不断提高以及围手术期处理的日趋完备，这部分患者仍可行外科治疗，其手术安全性较前大有提高。脾脏作为人体最大的外周淋巴器官，具有细胞免疫及体液免疫功能，在机体免疫反应中发挥着重要抗炎、抗肿瘤作用。正常脾脏切除后，可导致机体免疫功能下降，出现急性暴发性感染，甚至削弱人类的抗癌能力，特别是儿童。对肝癌伴肝硬化巨脾是否仍具有正常脾脏的免疫功能，尚无定论。对这类患者在行肝切除术时是否同时切除病理性脾脏，目前仍具较多争议。近年来，我国有部分医院开展了对肝癌合并肝硬化门静脉高压患者手术方式的研究。有关这方面的动物实验研究尚不多。本研究旨在通过在肝硬化门静脉高压的大鼠肝脏上种植肿瘤块，观察病理性脾脏的切除对肝肿瘤发展的影响。方法1.皮下注射四氯化碳（CCl4）诱导大鼠形成肝硬化门静脉高压，在肝硬化门静脉高压诱导前后分别测定大鼠的血常规和肝功能指标。在诱导过程中，随机处死大鼠，分别肉眼及光镜下观察大鼠的肝脏及脾脏。2.将Walker256细胞注射在幼鼠皮下形成肿瘤块，在门静脉高压大鼠肝脏的左外叶上种植肿瘤块。随机将大鼠等分为A、B两组，A组大鼠在种植肿瘤块同时切除脾脏，B组大鼠种植肿瘤块并保留脾脏。3.在大鼠肝脏种植肿瘤块10天后分别测定两组大鼠的T细胞亚群CD4、 CD8及CD4/CD8。4.切除两组大鼠的肝脏左外叶，测量种植肿瘤块最大直径（和）。5.大鼠肝脏左外叶上的肿瘤块用免疫组织化学染色方法检测肿瘤组织中Ki67的表达。6.计量资料以均数±标准差表示，对于诱导肝硬化门静脉高压形成前后所测定的血常规及肝功能各项指标以及A、B两组大鼠的T细胞亚群CD4、CD8、CD4/CD8、肝脏种植肿瘤块最大直径（和）、Ki67阳性率，均采用t检验。P<0.05认为有统计学意义。所有数据应用SPSS19.0软件分析处理。结果1.根据注射CCl4后大鼠的一般情况、肝脾大体观、肝脾镜检结果，以及注射CCl4前后大鼠血常规、肝功能各项指标的变化，共有42只大鼠诱导形成肝硬化门静脉高压。2. Walker256细胞在幼鼠皮下及大鼠肝脏上生长良好。3. A组大鼠的CD4值和CD4/CD8比值均高于B组大鼠（0.36±0.01vs0.35±0.02，1.33±0.08vs1.24±0.05；P<0.05，P<0.01），而CD8值则低于B组大鼠（0.27±0.01vs0.29±0.02，P<0.01）。4. A组大鼠的肝脏肿瘤块最大直径（和）与B组大鼠比较差异无统计学意义。5. A组大鼠肝脏肿瘤组织的Ki67阳性率为0.27±0.02，低于B组大鼠肿瘤组织的Ki67阳性率0.28±0.02，两组间差异具有统计学意义（P<0.05）。结论在皮下注射CCl4诱导形成肝硬化门静脉高压的大鼠肝脏上种植Walker256细胞肿瘤块，可以模拟肝癌合并门静脉高压的发病。病理性脾脏的切除有利于抗肿瘤免疫功能的改善，抑制肿瘤细胞的增殖。

脾切除对门静脉高压大鼠种植性肝肿瘤的影响

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