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低氧后处理通过p38MAPK/MSK1信号通路对成年大鼠短暂全脑缺血保护作用的研究

作　者: 祝萍萍
导　师: 徐恩
学　校: 广州医学院
专　业: 神经病学
关键词: 低氧后处理 短暂全脑缺血 神经保护 p38MAPK丝裂原活化蛋白激酶 丝裂原应激蛋白激酶1
分类号: R743.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


背景与目的：我们之前的研究显示，在成年雄性Wistar大鼠短暂全脑缺血（transient globalcerebral ischemia，tGCI)10分钟后，间隔1-2天，给予持续60-120分钟浓度为8%的（hypoxic postconditioning，HPC）低氧，可以减少tGCI后海马CA1区神经元的死亡。其中，间隔1天，120分钟HPC的保护作用最显著，且至少可持续至缺血再灌注后30天。但是，HPC相应的脑保护机制还不清楚。大量研究显示丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK）信号通路参与了脑缺血损伤。p38丝裂原活化蛋白激酶（p38mitogen-activated protein kinase, p38MAPK）/丝裂原应激蛋白激酶1（Mitogen and Stress Activated Protein Kinase1，MSK1）信号传导通路是MAPK信号通路的重要分支，在HPC诱导的神经保护中的作用还不明了。本研究在成年大鼠短暂全脑缺血低氧后处理模型的基础上研究p38MAPK和MSK1蛋白表达变化，探讨HPC是否通过p38MAPK/MSK1信号传导通路对成年大鼠tGCI起神经保护作用。材料与方法：选取年龄为20-25周的雄性Wistar大鼠，体重200～300g。按照Pulsinelli经典的四血管闭塞全脑缺血模型进行改良制作动物模型。低氧后处理方法是在大鼠缺血10分钟后24小时，放入一密闭箱内，连续通入8％O2＋92％N2混合气体2小时，低氧过程中观察动物情况，有无癫痫发作等。运用尼氏染色、免疫组化、免疫荧光及Western blot等多种方法观察缺血组、后处理+缺血组在不同再灌注时间点海马CA1区p38MAPK、磷酸化p38MAPK、MSK1及磷酸化MSK1的神经元形态变化及活性表达。结果：（1）与Sham组比较，海马CA1区磷酸化p38MAPK的免疫阳性神经细胞数在单纯低氧0小时、24小时变化不明显（p>0.05）；在tGCI组，阳性细胞数在再灌注0小时至26小时较Sham组升高，4小时达高峰，50小时及168小时逐渐下降，差异均有统计学意义；给予tGCI鼠低氧后处理，阳性细胞数在低氧后24小时、168小时均高于相对应时间点的tGCI组（p<0.05）。（2）磷酸化p38MAPK胶质样免疫阳性细胞数随着再灌注时间的延长而增加。与Sham组比较，阳性细胞数在再灌注0小时变化不明显（p>0.05）；4小时、26小时、50小时逐渐升高,168小时达高峰，差异均有统计学意义。tGCI后给予低氧后处理，低氧后24小时较相对应时间点的tGCI组阳性细胞数增多（p<0.05），而低氧后6天则较相对应时间点的tGCI组减少（p<0.05）。(3)Western blot结果显示：与Sham组比较，海马CA1区磷酸化p38MAPK的表达量在单纯低氧0小时、24小时无明显变化（p>0.05）；在tGCI组，磷酸化p38MAPK的表达量在0小时略升高，4小时达高峰（p<0.05），50小时低于Sham组水平（p<0.05）；tGCI后给予低氧后处理，低氧后24小时，磷酸化p38MAPK表达量升高，与相对应时间点的tGCI组比较，差异有统计学意义。（4）与Sham组比较，磷酸化MSK1的免疫阳性细胞数在单纯低氧0小时、24小时组无明显变化（p>0.05）；在tGCI组，在再灌注0小时无明显变化，再灌注4小时达高峰（p<0.05），168小时组低于Sham组水平（p<0.05）；给予tGCI鼠低氧后处理，阳性细胞数在低氧后24小时、6天均高于对应时间点的tGCI组（p<0.05）。(5)磷酸化MSK1胶质样神经细胞数在再灌注0小时，4小时无明显变化，26小时、50小时逐渐增多，7天达到高峰，差异均有统计学意义。tGCI后给予低氧后处理，低氧后24小时较对应缺血组阳性细胞数增多（p<0.05），168小时组胶质样神经细胞数较对应时间点的tGCI组减少（p<0.05）。(6)Western blot结果显示：与Sham组比较，海马CA1区磷酸化MSK1的表达量在单纯低氧0小时、24小时无明显变化（p>0.05）；tGCI组的磷酸化MSK1的表达量在再灌注4小时略升高（p<0.05），26小时达高峰（p<0.05），50小时则降至基线水平； tGCI后给予低氧后处理，磷酸化MSK1的表达量在低氧后24小时升高，与对应时间点的tGCI组比较，差异有统计学意义。（7）免疫荧光双标显示，Sham组海马CA1区磷酸化p38MAPK细胞与NeuN共表达，磷酸化MSK1细胞主要与NeuN共表达，少数与MAP-2共表达；在tGCI组和HPC组磷酸化p38MAPK细胞与GFAP共表达，磷酸化MSK1细胞与GFAP和Ox-42均有共表达。结论：p38MAPK/MSK1信号传导通路参与HPC对成年大鼠tGCI的神经保护机制，低氧后处理可能通过活化p38MAPK/MSK1信号通路，减少神经细胞损伤，从而产生神经保护作用。

全文目录


简略词索引  4-5
中文摘要  5-8
英文摘要  8-11
前言  11-12
材料方法  12-18
结果  18-21
讨论  21-25
结论  25
参考文献  25-28
附图  28-38
综述  38-47
  参考文献  44-47
在读期间参与的研究及发表的论文  47-48
致谢  48-50

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学 > 脑血管疾病 > 急性脑血管疾病（中风）
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