学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

Surfactin体外抗肿瘤机理研究

作　者: 赵思思
导　师: 曹小红
学　校: 天津科技大学
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: Surfactin PT孔 Ca2+ ROS ERK/MAPK通路
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 18次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


实验采用的枯草芽孢杆菌Bacillus natto TK-1发酵产生的脂肽——surfactin,被广泛认为是一种安全高效的生物表面活性剂。它具有显著的抗菌,抗肿瘤,抗病毒及溶解血栓等功能,其中关于抗肿瘤和抗病毒功能的研究较少。课题组经过前期实验发现,surfactin能够通过线粒体途径诱导MCF-7乳腺癌细胞发生凋亡。线粒体通透性转换孔(MPTP,简称PT孔)作为细胞的“生命闸门”,在细胞凋亡过程中发挥着至关重要的作用。本文主要探讨PT孔在surfactin诱导的MCF-7乳腺癌细胞凋亡过程中的作用机理,以及ERK/MAPK通路与细胞增殖和凋亡的关系。surfactin诱导MCF-7乳腺癌细胞的PT孔开放与细胞凋亡的关系及作用机理,以及,ERK/MAPK通路对于肿瘤细胞生长增殖的影响。本论文以体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞株为研究对象,探讨surfactin对肿瘤细胞增殖和凋亡的作用,并深入探讨相关的作用机理。体外增长抑制实验表明,surfactin能显著抑制MCF-7乳腺癌细胞的增殖,这种抑制作用呈现出浓度和时间依赖关系,作用24h的IC50是40.2μg/mL,作用48h的IC50是32.3μg/mL。HE染色法和AO/EB、Hoechst33342/PI荧光双染发现,surfactin诱导MCF-7细胞发生典型的凋亡形态学改变。实验采用激光共聚焦显微镜(LSCM)观察发现,经surfactin作用后,MCF-7细胞内的活性氧(ROS)水平和胞内游离钙离子(Ca2+)水平显著升高,这一趋势分别可被ROS抑制剂NAC和胞内Ca2+螯合齐BAPTA-AM所抑制,且Ca2+水平的升高是由ROS的大量生成所致。同时发现,ROS的升高将会导致PT孔的开放,PT孔专一性抑制剂CsA可以抑制其开放,PT孔的开放直接引起线粒体跨膜电位(△Ψm)的显著降低,这一趋势可被NAC、BAPTA-AM和CsA所抑制。通过免疫印迹(Western blotting)实验发现,PT孔开放后,线粒体内细胞色素C(Cyt C)减少,而胞浆内的Cyt C则逐渐增多,胞内caspase-9蛋白的表达量也随之增加。此外,p-ERK蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量也随之下调。综上所述,surfactin具有诱导MCF-7肿瘤细胞发生凋亡的作用,其凋亡机制可能与线粒体途径及PT孔的开放有关。另外,ERK/MAPK通路参与了surfactin对MCF-7细胞的增殖抑制作用。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-8
1 前言  8-20
  1.1 纳豆及纳豆菌  8
  1.2 Surfactin概述  8
  1.3 肿瘤与乳腺癌  8-10
    1.3.1 肿瘤概述  8-9
    1.3.2 乳腺癌概述  9
    1.3.3 乳腺癌的治疗  9-10
  1.4 细胞凋亡与肿瘤  10-11
    1.4.1 细胞凋亡概述  10
    1.4.2 细胞凋亡与细胞坏死的区别  10
    1.4.3 细胞凋亡与肿瘤的发生  10-11
    1.4.4 细胞凋亡与肿瘤的治疗  11
  1.5 细胞凋亡的信号转导通路  11-18
    1.5.1 细胞凋亡通路概述  11-12
    1.5.2 线粒体与细胞凋亡  12
    1.5.3 线粒体通透转换孔(PT孔)与细胞凋亡  12-15
    1.5.4 膜电位(ΔΨm)的变化与细胞凋亡  15
    1.5.5 细胞色素C(Cyt C)释放与细胞凋亡  15-16
    1.5.6 Caspase的活化与细胞凋亡  16
    1.5.7 MAPK家族概述  16-18
    1.5.8 Bcl-2家族与细胞凋亡  18
  1.6 本论文的研究目的及意义  18-19
  1.7 本论文的主要研究内容  19-20
2 材料与方法  20-33
  2.1 实验材料  20-23
    2.1.1 菌种与细胞株  20
    2.1.2 主要药品  20-22
    2.1.3 仪器与设备  22-23
    2.1.4 主要培养基  23
    2.1.5 主要溶液  23
  2.2 实验方法  23-33
    2.2.1 Surfactin的制备  23-24
    2.2.2 细胞体外培养  24-25
    2.2.3 细胞体外增殖抑制实验  25
    2.2.4 细胞形态学观察  25-27
    2.2.5 WST-1细胞增殖实验  27
    2.2.6 流式细胞术分析细胞凋亡率  27-28
    2.2.7 细胞内ROS水平的检测  28
    2.2.8 细胞内游离Ca~(2+)浓度的检测  28-29
    2.2.9 PT孔开放的检测  29
    2.2.10 线粒体ΔΨm的测定  29-30
    2.2.11 线粒体细胞色素C的检测  30
    2.2.12 免疫印迹实验  30-33
3 结果与讨论  33-55
  3.1 Surfactin诱导MCF-7细胞凋亡  33-36
    3.1.1 Surfactin对MCF-7细胞和L-02细胞体外增殖抑制实验(MTT)  33
    3.1.2 细胞形态学观察实验  33-36
  3.2 PT孔在surfactin诱导MCF-7细胞凋亡过程中的作用机理  36-51
    3.2.1 ROS在surfactin诱导的MCF-7细胞PT孔开放和细胞凋亡中的作用  36-39
    3.2.2 Ca~(2+)在surfactin诱导的MCF-7细胞PT孔开放和细胞凋亡中的作用  39-42
    3.2.3 ROS与Ca~(2+)的相互关系  42-44
    3.2.4 检测PT孔的开放  44-47
    3.2.5 Surfactin对MCF-7细胞线粒体ΔΨm的影响  47-49
    3.2.6 MCF-7细胞线粒体Cyt C的释放  49-50
    3.2.7 MCF-7细胞caspase-9活性的检测  50-51
  3.3 ERK/MAPK通路在surfactin诱导MCF-7细胞凋亡过程中的作用机理  51-55
    3.3.1 p-ERK蛋白表达在surfactin诱导的MCF-7细胞中的变化  51-53
    3.3.2 Bcl-2蛋白表达在surfactin诱导的MCF-7细胞中的变化  53-55
4 结论  55-56
5 展望  56-57
6 参考文献  57-68
7 攻读硕士学位期间论文发表情况  68-69
8 致谢  69

相似论文

  1. 极端温度对佛手光合生理，抗氧化酶系及ROS的影响,Q945.78
  2. 栗疫病菌凋亡抑制蛋白基因Cpbirl的功能研究,S436.64
  3. 稻瘟病菌SNARE蛋白的生物信息学分析及Mgsec22的功能研究,S435.111.41
  4. 苹果Ca2+/H+反向转运体活性及其基因表达特性研究,S661.1
  5. 硒对饮水型氟中毒致脑损伤的干预分子机理研究,R599
  6. Bacillus subtilis fmbJ抗菌脂肽对Rhizopus stolonifer作用机理研究,TS255.1
  7. 栗疫病菌凋亡抑制蛋白基因Cpbir1的功能研究,S436.64
  8. 磷脂酶Dα1和Ca2+在拟南芥气孔关闭中的相互关系研究,Q946
  9. 头孢噻肟对细胞内钙离子跨膜行为影响的研究,R96
  10. 苯酚细胞毒性、DNA损伤及修复作用的研究,R114
  11. 低强度微波辐射对γ射线和盐酸阿霉素致造血系统细胞损伤的防护作用,R733.71
  12. 迷迭香酸对放射致DNA损伤的防护作用及其机制的初步研究,R818
  13. 锡酸盐纳米发光材料的制备与表征,TB383.1
  14. L型Ca2+通道在帕金森病黑质多巴胺能神经元损伤中的作用研究,R742.5
  15. 钙离子浓度荧光显微检测系统中控制模块的设计,R318.6
  16. 信号分子N-酰基高丝氨酸内酯诱导拟南芥根细胞胞内Ca2+浓度变化,Q946
  17. 15-差向异构体—脂氧素A4对脂多糖诱导小胶质细胞内活性氧产生的影响及其机制研究,R363
  18. 两亲接枝共聚膦腈的纳米毒性的初步研究,R943
  19. 磷灰石和硅质脉石浮选分离的研究,TD97
  20. 抗心肌Na~+/Ca~(2+)交换体α-1_(138-177)和α-2_(840-877)多克隆抗体的制备及其功能研究,R392
  21. 白花丹醌增强TRAIL诱导Kasumi-1细胞凋亡及其机制研究,R285.5

中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 乳腺肿瘤
© 2012 www.xueweilunwen.com