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微碱法提取淮山药糖蛋白及其理化性质的研究

作　者: 王艳乔
导　师: 张黎明
学　校: 天津科技大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 淮山药 山药糖蛋白 微碱法提取 分离纯化 理化性质
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


我国是山药生产及产量的第一大国,山药具有增强免疫调节、抑制肿瘤、降低血糖、血脂、防衰老等药理作用。目前,山药用于保健性食品开发已经取得了一些可喜的成果。但在山药单一的重要的活性成分糖蛋白的开发利用方面还有较大的发展空间。为了适应开发需求与市场需要,在寻求较好品质、较高产率的糖蛋白的基础上,应用一种新的提取分离方法,即微碱法提取分离山药中的糖蛋白,并测定此种提取方法下得到的糖蛋白纯品的物理化学特性。试验中以淮山药为原料,以食用级碳酸钠调节山药粉溶液的pH值,采用微碱法提取山药中的糖蛋白。分别考察了提取时间、提取温度、提取pH值、料液比、提取次数与山药粉颗粒大小六个因素对山药糖蛋白提取率的影响,同时考虑到低提取周期,低能耗、低提取成本的要求,选择出合适的四因素(提取温度、提取时间、提取pH值、料液比)和三水平进行正交试验,结果表明：山药糖蛋白的最优提取条件为：提取温度为60℃,提取时间为2.0h,料液比为1：15,pH=10,此时,淮山药糖蛋白的平均得率为0.74%。应用DEAE-52纤维素及SephadexG-75柱层析对糖蛋白粗提取物进行了分离纯化,经梯度洗脱,分别得到中性糖蛋白组分GLP-P1和酸性糖蛋白GLP-P2。对两种糖蛋白进行红外光谱扫描,其结果的特征吸收峰初步显示它们为糖蛋白结构。鉴于两种糖蛋白得率的限制,主要对GLP-P2的物理性质进行了测定。结果表明GLP-P2为纯净的单一糖蛋白组分,其分子量约为30kDa; GLP-P2中蛋白含量：糖含量=20：1GLP-P2是长肽链上带有短糖链的结合糖蛋白,糖链中含有D-葡萄糖,L-半乳糖和甘露糖三种单糖GLP-P2多肽链中氨基酸组成为17种氨基酸,其中,谷氨酸和门冬氨酸的含量较高,此种糖蛋白中含有必需氨基酸和非必需氨基酸,这说明GLP-P2具有较高的营养价值；碱处理前后,对特定氨基酸含量的变化进行测定,试验表明GLP-P2的糖链是以O-糖肽键连接到苏氨酸上的。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
目录  7-9
1 前言  9-19
  1.1 山药的种类分布及其研究概况  9-17
    1.1.1 山药的种类及分布现状  9
    1.1.2 山药的营养成分和药用价值  9-11
    1.1.3 山药的有效成分及其药理作用研究  11-14
    1.1.4 山药糖蛋白的相关研究进展  14-17
    1.1.5 山药产品的开发利用  17
  1.2 本课题的研究意义和内容  17-19
    1.2.1 本课题研究的意义  17-18
    1.2.2 本课题研究的主要内容  18-19
2 材料与方法  19-35
  2.1 材判  19
  2.2 试验试剂  19-20
  2.3 试验仪器设备  20
  2.4 试验方法  20-35
    2.4.1 淮山药片的质量测定  20-21
    2.4.2 微碱法提取淮山药中糖蛋白的工艺流程  21-23
    2.4.3 淮山药中糖蛋白提取率的测定方法  23-26
    2.4.4 淮山药糖蛋白的提取工艺优化方法  26-28
    2.4.5 淮山药糖蛋白粗提取物的分离纯化  28-31
    2.4.6 纯化的淮山药糖蛋白的理化性质鉴定  31-35
3 结果与讨论  35-58
  3.1 淮山药片的质鉴定结果  35-36
    3.1.1 淮山药片的性状  35
    3.1.2 淮山药片的水分含量  35
    3.1.3 淮山药片的浸出物含量  35-36
  3.2 测定山药糖蛋白含量的分析方法研究结果  36-40
    3.2.1 苯酚-硫酸法测定糖蛋白含量  36-39
    3.2.2 考马斯亮蓝法测定糖蛋白含量  39-40
  3.3 淮山药糖蛋白的提取工艺优化  40-47
    3.3.1 淮山药糖蛋白醇沉浓度的确定  40-41
    3.3.2 单因素试验结果分析  41-45
    3.3.3 正交试验设计结果分析  45-47
    3.3.4 淮山药糖蛋白最优提取工艺的验证  47
  3.4 淮山药糖蛋白的分离纯化工艺  47-51
    3.4.1 紫外法测定柱洗脱流分中蛋白含量  47-48
    3.4.2 DEAE-52纤维素柱层析用于淮山药糖蛋白分离  48-49
    3.4.3 Sephadex G-75柱层析用于淮山药糖蛋白的纯化  49-51
  3.5 淮山药糖蛋白提取分离纯化的总工艺流程  51-52
  3.6 纯化的淮山药糖蛋白理化性质的鉴定  52-58
    3.6.1 红外光谱定性测定GLP-P1和GLP-P2的结构  52-53
    3.6.2 淮山药糖蛋白GLP-P2的理化性质鉴定  53-58
4 结论  58-59
5 展望  59-60
6 参考文献  60-66
7 攻读硕士学位期间发表论文情况  66-67
8 致谢  67

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
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