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止泻木子的活性物质研究

作　者: 耿金峰
导　师: 钱斯日古楞
学　校: 大连工业大学
专　业: 发酵工程
关键词: 止泻木子生物碱体外抑菌分离纯化锥丝碱
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

止泻木子是夹竹桃科植物止泻木的干燥种子，具有很高的药用价值，是蒙药中的常用药物，对病毒性感冒、肝炎和肠炎等疾病具有独特的疗效。近年来国内外对蒙药进行了广泛的研究，但对止泻木子的研究还没有报道过。本文对止泻木子的活性物质之一的生物碱进行了初步研究，为止泻木子活性成分的进一步研究奠定了基础。本研究采用乙醇提取法对止泻木子的活性物质进行提取，对乙醇浓度、提取时间、提取温度等提取参数进行分析，通过正交实验确定了乙醇浸提的最佳提取工艺，再利用有机溶剂萃取法和硅胶柱层析法对浸提得到的活性物质进行了分离纯化，最后得到一种生物碱单体。并研究了粗提物和总生物碱的体外抗菌作用。实验结果表明，止泻木子采用70%的乙醇在60℃条件浸泡6h为最佳，采用此工艺提取的粗提取物提取得率可以达到5.36%。经有机溶剂萃取法和硅胶柱层析法分离最后得到了一种生物碱单体，通过高效液相色谱法纯度测定为94.89%，经过质谱和核磁共振等技术确定此单体为锥丝碱。粗提物和总生物碱的体外抑菌实验采用大肠杆菌ATCC25922、藤黄八叠球菌AS1.880、北京棒杆菌AS1.299、大肠杆菌AS1.543、金黄色葡萄球菌AS1.72和单增李斯特杆菌CMCC34005等菌种的抑制效果来研究，通过对止泻木子粗提取物和总生物碱的抑菌效果试验，发现止泻木子的粗提取物对一般常见的细菌均起到抑制作用，说明止泻木子的70%乙醇提取物中含有可以抑制细菌的活性成分；止泻木子的粗提取物对大肠杆菌AS1.543、大肠杆菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌AS1.72和藤黄八叠球菌AS1.880的最低抑菌浓度均为100mg/mL，对北京棒杆菌AS1.299和单增李斯特杆菌CMCC34005的最低抑菌浓度均为75mg/mL；而总生物碱对金黄色葡萄球菌AS1.72的最低抑菌浓度为50mg/mL，对大肠杆菌AS1.543的最低抑菌浓度为75mg/mL，对单增李斯特杆菌CMCC34005的最低抑菌浓度为25mg/mL。总生物碱对常见细菌的抑制作用要强于粗提取物对常见细菌的抑制作用，表明止泻木子中含有的总生物碱对细菌具有很强的抗菌作用。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-10
第一章绪论  10-29
  1.1 蒙药简介  10-11
  1.2 止泻木子简介  11-12
  1.3 生物碱简介  12
  1.4 生物碱的理化性质  12-16
    1.4.1 生物碱的性质  12-16
      1.4.1.1 生物碱的碱性  13
      1.4.1.2 生物碱的溶解性  13-14
      1.4.1.3 生物碱的检识  14-16
      1.4.1.4 生物碱在植物体中存在形式  16
  1.5 生物碱的提取与分离  16-25
    1.5.1 总生物碱提取  17-19
      1.5.1.1 生物碱的溶剂提取法  17-18
      1.5.1.2 超声提取法  18
      1.5.1.3 超临界萃取  18-19
    1.5.2 生物碱的分离纯化  19-25
      1.5.2.1 系统分离法  19-21
      1.5.2.2 利用生物碱或生物碱盐溶解度的差异进行分离  21
      1.5.2.3 利用生物碱特殊功能基性质不同进行分离  21
      1.5.2.4 结晶法分离  21
      1.5.2.5 色谱法分离  21-22
      1.5.2.6 树脂吸附法分离  22-23
      1.5.2.7 分子印迹法分离  23
      1.5.2.8 膜提取法分离  23-24
      1.5.2.9 高速逆流色谱分离法  24-25
  1.6 生物碱结构分析方法  25-26
  1.7 生物碱的作用  26-28
    1.7.1 抗肿瘤作用  26
    1.7.2 作用于心血管  26-27
    1.7.3 作用于神经系统  27
    1.7.4 抗菌消炎作用  27
    1.7.5 其它作用  27-28
  1.8 本课题研究的内容与目的  28-29
    1.8.1 本课题研究的目的  28
    1.8.2 本实验研究的内容  28-29
第二章材料与方法  29-39
  2.1 材料  29-31
    2.1.1 实验药材  29
    2.1.2 实验试剂  29
    2.1.3 仪器设备  29-30
    2.1.4 实验菌种  30
    2.1.5 主要培养基及制备  30-31
  2.2 实验方法  31-39
    2.2.1 原料的预处理  31
    2.2.2 止泻木子提取工艺的研究  31-33
      2.2.2.1 总生物碱的测定方法  31
      2.2.2.2 提取工艺的单因素实验  31-32
      2.2.2.3 最佳提取工艺参数的研究  32
      2.2.2.4 活性物质的提取得率确定  32-33
    2.2.3 止泻木子提取物的抑菌活性研究  33-34
      2.2.3.1 供试菌株的活化  33
      2.2.3.2 培养基平板制备  33
      2.2.3.3 菌悬液的制备  33
      2.2.3.4 粗提物的抑菌作用研究  33-34
      2.2.3.5 粗提物的最低抑菌浓度研究  34
      2.2.3.6 总生物碱的抑菌作用研究  34
    2.2.4 生物碱类化合物的纯化研究  34-39
      2.2.4.1 显色剂配制  34
      2.2.4.2 总生物碱的分离  34-36
      2.2.4.3 薄层层析检测  36
      2.2.4.4 样品层的制备  36
      2.2.4.5 硅胶柱的制备  36-37
      2.2.4.6 硅胶柱的洗脱  37
      2.2.4.7 生物碱的结晶法纯化  37-38
      2.2.4.8 高效液相色谱法定性检测生物  38
      2.2.4.9 生物碱类化合物的结构鉴定  38-39
第三章结果与讨论  39-54
  3.1 提取过程中影响因素的分析  39-42
    3.1.1 乙醇浓度对提取率的影响  39
    3.1.2 时间对提取率的影响  39-40
    3.1.3 温度对提取率的影响  40-41
    3.1.4 正交实验分析  41-42
    3.1.5 活性物质的提取得率确定  42
  3.2 提取物抗菌活性分析  42-46
    3.2.1 粗提取物抑菌实验结果  42-44
    3.2.2 粗提取物最低抑菌浓度的确定  44-45
    3.2.3 总生物碱的抑菌结果  45-46
  3.3 生物碱的纯化研究  46-54
    3.3.1 止泻木子中生物碱的初步分析结果  46-47
    3.3.2 硅胶柱分离结果  47-48
    3.3.3 样品纯度测定  48-49
    3.3.4 结构鉴定结果  49-53
    3.3.5 生物碱的提取得率的确定  53-54
第四章结论  54-55
参考文献  55-60
致谢  60

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