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中药复方有效组分对APP转基因小鼠学习记忆的影响及其作用机理研究

作　者: 官杰
导　师: 李浩；刘剑刚
学　校: 中国中医科学院
专　业: 中医内科学
关键词: 阿尔茨海默病 β淀粉样蛋白 APP转基因小鼠中药复方炎症因子氧化应激
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

老年性痴呆又称阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD),是一种常见的以进行性认知功能减退为特征的中枢神经系统变性疾病。随着全球人口的老龄化,AD的发病率呈不断上升趋势,但迄今为止,AD作为一个世界医学难题,其发病机制尚不十分清楚,理想的治疗手段和药物仍然缺乏。中医根据辨证论治,尤其是充分发挥中药复方多途径、多环节、多靶点、多向调节的作用特点,在防治AD方面具有优势和前景。还脑益聪方是基于中医AD“虚-瘀-浊-毒”病机的中药复方,经前期临床和实验研究证实对AD有较好的防治作用,现应用现代工艺技术提取其有效组分,进一步研究本方对AD动物模型的作用机理和效应途径,为临床治疗AD提供依据。目的：基于AD发病机理中的“Aβ级联学说”,研究中药复方还脑益聪方有效组分对AD动物模型脑组织Aβ生成途径及炎症反应和氧化应激相关指标的影响,探讨还脑益聪方治疗AD的作用机理。方法：选用3月龄APP695V717I转基因小鼠AD模型,随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组、还脑益聪方有效组分大剂量组和小剂量组,并设立正常对照组(C57BL/6J小鼠),连续灌胃6个月后进行相关指标检测。本实验共分为三个部分。第一部分,采用Morris水迷宫观测APP转基因小鼠空间学习记忆能力,采用跳台实验观测小鼠一次性被动回避反应记忆功能,研究还脑益聪方对APP转基因小鼠行为学的影响。第二部分,采用免疫组织化学法检测APP转基因小鼠脑组织APP、BACE和Aβ等蛋白表达水平,采用刚果红染色观察小鼠脑组织淀粉样沉积的变化,研究还脑益聪方对APP转基因小鼠脑组织Ap生成途径的影响。第三部分,采用免疫组织化学法检测APP转基因小鼠脑组织AD免疫炎症相关核转录因子NF-κB、PPARγ的表达水平,采用放射免疫法检测APP转基因小鼠脑组织皮层和海马的炎症因子IL-6、hs-CRP的含量；采用双缩脲法测定APP转基因小鼠皮层、海马的总蛋白含量；采用比色法检测APP转基因小鼠血清SOD活性,采用硫代巴比妥酸法测定小鼠血清MDA含量,研究还脑益聪方对APP转基因小鼠脑内炎症因子和氧化应激的影响。结果：第一部分,还脑益聪方对APP转基因小鼠行为学的影响。行为学实验表明,还脑益聪方组和盐酸多奈哌齐组小鼠在Morris水迷宫中穿越原平台位置次数均较模型组显著增多(P<0.05),在原平台所在第四象限游泳时间和游泳路程亦均较模型组显著延长(P<0.05或P<0.01)。各给药组小鼠在跳台实验中的错误次数与模型组比较无显著性差异(P>0.05),还脑益聪方大剂量组和盐酸多奈哌齐组小鼠潜伏期较模型组显著延长(P<0.01或P<0.05),还脑益聪方小剂量组小鼠潜伏期亦有延长趋势,但较模型组无显著性差异(P>0.05)。第二部分,还脑益聪方对APP转基因小鼠脑组织Ap生成途径的影响。还脑益聪方组和盐酸多奈哌齐组小鼠海马CA1区APP阳性细胞数目和面积比例较模型组均显著减少(P<0.01)；还脑益聪方组小鼠海马CA1区BACE阳性细胞数目较模型组显著减少(P<0.01),盐酸多奈哌齐组较模型组亦有所减少,但无显著性差异(P>0.05)；各给药组小鼠海马CA1区Ap阳性细胞数目和面积比例较模型组均显著减少(P<0.05或P<0.01)。刚果红染色发现,模型组小鼠在皮层及海马均出现散在分布的橘红色沉积物,大小不一、染色不均,其中海马体部分布较为密集；与模型组比较,还脑益聪方组和盐酸多奈哌齐组小鼠脑组织橘红色染色比较局限,染色较浅,数目明显减少。第三部分,还脑益聪方对APP转基因小鼠脑组织炎症因子和氧化应激的影响。还脑益聪方组和盐酸多奈哌齐组小鼠治疗后,海马CA1区NF-κB阳性细胞数目较模型组显著减少(P<0.05或P<0.01),PPARy阳性细胞数目较模型组显著增多(P<0.05)；脑组织IL-6的含量比较,还脑益聪方组小鼠皮层IL-6的含量较模型组显著减少(P<0.05或P<0.01),盐酸多奈哌齐组小鼠皮层IL-6的含量较模型组亦有所减少,但无显著性差异(P>0.05),还脑益聪方小剂量组和盐酸多奈哌齐组小鼠海马IL-6的含量较模型组显著减少(P<0.05),还脑益聪方大剂量组小鼠海马IL-6的含量较模型组亦有所减少,但无显著性差异(P>0.05)；脑组织hs-CRP的含量比较,各给药组小鼠海马和皮层的hs-CRP含量较模型组均呈减少趋势,但无显著性差异(P>0.05)。还脑益聪方组小鼠血清SOD活性较模型组显著升高(P<0.05或P<0.01),盐酸多奈哌齐组小鼠血清SOD活性与模型组比较无显著性差异(P>0.05)；各给药组小鼠血清MDA含量与模型组比较无显著性差异(P>0.05)。结论：还脑益聪方有效组分可以明显改善APP转基因小鼠空间学习记忆能力和-次性被动回避反应记忆功能；还脑益聪方有效组分可以通过下调APP转基因小鼠脑组织APP及其p分泌酶的表达,减少Ap的生成和聚集,减少脑内淀粉样沉积的形成；还脑益聪方有效组分可以上调APP转基因小鼠脑组织炎症相关核转录因子PPARγ的表达,抑制NF-κB的表达,降低脑组织炎症因子的含量,减轻炎症反应；还脑益聪方有效组分对APP转基因小鼠的血清氧自由基清除能力有显著提高作用,能减轻氧化应激反应。本研究提示用还脑益聪方治疗APP转基因小鼠AD模型,可以减轻小鼠脑内Aβ的神经毒性及其诱导的炎症反应和氧化应激,改善其学习记忆能力,提示还脑益聪方对AD的治疗具有多作用靶点,可以通过抗Ap神经毒性、抗炎、抗氧化的作用途径防治AD。

全文目录

英文缩略词表  6-8
中文摘要  8-11
ABSTRACT  11-15
文献综述  15-54
  综述一:炎症反应和氧化应激在老年性痴呆Ap神经毒性中的研究进展  15-38
    1 Aβ神经毒性作用概述  15-18
    2 Aβ诱导炎症因子的级联反应  18-24
    3 Aβ诱导氧化应激反应  24-26
    4 AD中抗炎症反应和氧化应激的药物治疗  26-30
    参考文献  30-38
  综述二:从中医虚、毒病机论治老年性痴呆的研究进展与思考  38-54
    1 中医学对老年性痴呆因虚致病的病机研究  38-41
    2 中医学对毒邪致病的病机研究  41-44
    3 老年性痴呆虚、毒理论相关中药复方的基础与临床应用研究  44-49
    4 小结  49-50
    参考文献  50-54
实验研究  54-82
  前言  54-57
    1 选题背景及意义  54-55
    2 还脑益聪方治疗AD的前期研究基础  55-56
    3 研究的主要内容和技术手段  56-57
  第一部分还脑益聪方有效组分对APP转基因小鼠行为学的影响  57-65
    1 材料  57
    2 方法  57-59
    3 实验结果  59-61
    4 讨论  61-64
    5 小结  64-65
  第二部分还脑益聪方有效组分对APP转基因小鼠脑组织p淀粉样蛋白生成途径的影响  65-72
    1 材料  65
    2 方法  65-66
    3 实验结果  66-69
    4 讨论  69-71
    5 小结  71-72
  第三部分还脑益聪方有效组分对APP转基因小鼠脑组织炎症因子和氧化应激的影响  72-82
    1 材料  72-73
    2 方法  73-74
    3 实验结果  74-77
    4 讨论  77-81
    5 小结  81-82
结论  82-83
参考文献  83-86
附图  86-92
致谢  92-94
个人简历  94-95

中药复方有效组分对APP转基因小鼠学习记忆的影响及其作用机理研究

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