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多棘海盘车化学成分的分离与鉴定研究

作　者: 田丽冉
导　师: 李伟
学　校:
专　业: 水产品加工及贮藏工程
关键词: 多棘海盘车 化学成分 分离与鉴定 血管紧张素I转换酶 抗癌活性
分类号: R284.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
下　载: 2次
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内容摘要


多棘海盘车(Asterias amurensis Lutken)属于海盘车科(Asteriidae)海盘车属(Asterias)，又叫做五角星、海星、星鱼，于我国渤海、黄海海域分布广泛。研究表明，海星的化学成分大多具有抗癌、降压、细胞毒性、溶血及抗炎等生物活性。本文主要对多棘海盘车做了以下的工作：1.化学成分研究：用70%乙醇对多棘海盘车进行提取后进一步分离纯化。一部分乙醇粗提物通过大孔吸附树脂分离，用五种不同浓度乙醇洗脱后，得到组分A1-A5；另一部分用石油醚脱脂后，依次用乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，各层浸膏依次记为B1-B4。利用多种色谱技术和重结晶等化学物理方法分别对乙酸乙酯和正丁醇浸膏分离提纯，共分离得到8种单体化合物，通过理化常数测定及NMR数据分析，得到了6种化合物的结构，它们分别为：Phalluside1（AAL-I），N-(胆甾-5-烯-3β-烃基)-3β-醋酸酯-5-乙基-17β-咪唑羧酰胺（AAL-II），胆甾-5,20(22)-二烯-3β-醇（AAL-V），肉豆蔻酸（AAL-VI），一水合立方癸烷（AAL-Ⅶ），(2S)-1-O-heptatriacontanoyl glycerol（AAL-Ⅷ）。其中AAL-I、AAL-II、AAL-V、AAL-Ⅷ为属首分。2.生物活性研究：测定九种粗组分对ACE酶的抑制作用，结果表明，各粗组分均对其具有剂量依赖性。90%乙醇洗脱物的IC50值（23.98mg·ml-1）和正丁醇层的IC50值（27.76mg·ml-1）分别为两组中最小的。结合各组分中甾体化合物含量测定结果可推断出皂苷含量可以影响ACE酶的活性。利用MTT法研究A2-A5对H292和H1299两种人肺癌细胞生长的影响。50%乙醇洗脱物对H1299的抑制率高达95.12%。利用MTT&SRB法研究了AAL-I（Phalluside1）和AAL-V（胆甾-5,20(22)-二烯-3β-醇）对6种癌细胞生长的影响。作用48h后， AAL-I对6种癌细胞均无明显抑制作用， AAL-V对6种癌细胞的抑制率随浓度的减小而降低。100μg·ml-1的AAL-V对SW620抑制作用最显著，其IC50值最小，仅为24.95±0.77μg·ml-1。采用流式细胞术检测不同浓度AAL-V分别处理HL60、SKBR-3和SW620细胞24h后的细胞状态，结果表明AAL-V可诱导三种癌细胞发生凋亡，且具有剂量依赖性。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-8
1 文献综述  8-19
  1.1 多棘海盘车简介  8
  1.2 海星化学成分的结构研究  8-16
    1.2.1 甾醇  8-10
    1.2.2 甾体皂苷  10-13
    1.2.3 神经酰胺与脑苷脂  13-14
    1.2.4 脂肪酸  14-15
    1.2.5 其它  15-16
  1.3 海星生物活性研究  16-18
    1.3.1 细胞毒性及溶血作用  16
    1.3.2 抗肿瘤活性  16-17
    1.3.3 降血压、降血清胆固醇作用  17
    1.3.4 抗菌、抗病毒活性  17
    1.3.5 抗心律失常作用  17
    1.3.6 抗炎、抗溃疡活性  17-18
  1.4 立题的目的及意义  18-19
2 多棘海盘车化学成分的分离纯化  19-31
  2.1 实验材料  19-20
    2.1.1 实验原料  19
    2.1.2 实验试剂和材料  19
    2.1.3 实验设备  19-20
  2.2 实验方法  20-25
    2.2.1 树脂柱分离纯化总甾体化合物  20-21
    2.2.2 萃取法分离纯化总甾体化合物  21-22
    2.2.3 甾体化合物的鉴定  22
    2.2.4 皂苷含量测定  22-23
    2.2.5 化学成分的分离纯化  23-25
  2.3 结果与讨论  25-29
    2.3.1 各粗组分的提取率  25-26
    2.3.2 甾体化合物的鉴定  26-27
    2.3.3 皂苷含量测定  27-29
  2.4 小结  29-31
3 多棘海盘车单体化合物结构鉴定  31-40
  3.1 实验试剂与设备  31
    3.1.1 实验试剂  31
    3.1.2 实验设备  31
  3.2 化合物的纯度测定  31-34
  3.3 化合物的结构解析及波谱数据  34-40
    3.3.1 甾体类化合物  34-36
    3.3.2 脑苷脂类化合物  36-37
    3.3.3 脂肪酸类化合物  37-38
    3.3.4 其它  38-40
4 多棘海盘车化学成分活性研究  40-54
  4.1 总甾体化合物降血压活性  40-43
    4.1.1 实验试剂与仪器  40
    4.1.2 实验原理  40-41
    4.1.3 实验方法  41
    4.1.4 实验结果与讨论  41-43
  4.2 总甾体化合物抗癌活性  43-46
    4.2.1 实验材料与试剂  43-44
    4.2.2 实验原理  44
    4.2.3 实验方法  44-45
    4.2.4 结果与讨论  45-46
  4.3 单体化合物抗癌活性  46-52
    4.3.1 实验材料与试剂  46
    4.3.2 实验方法  46-47
    4.3.3 结果与讨论  47-52
  4.4 小结  52-54
5 结论  54-55
参考文献  55-60
攻读硕士学位期间发表的学术论文  60-63
致谢  63-64
附录  64-72

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学 > 有效成分的分离与提取
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