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安徽特色中药断血流提取物（片）的有效成分研究

作　者: 王圣男
导　师: 余世春
学　校:
专　业: 生药学
关键词: 断血流 断血流提取物 断血流片 化学成分 黄酮类 三萜类皂苷 ClinopolisideII buddlejasaponin IVb 含量测定 HPLC-ELSD
分类号: R284.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


断血流为多年生草本植物唇形科荫风轮Clinopodium polycephalum （Vaniot）C.Y.Wu et Hsuan ex Hsuan与风轮菜Clinopodium chinensis （Benth.） O.Ktze的干燥地上部分。风轮菜首载于《救荒本草》（1406年）草部，叶可食用，名曰风轮菜，无药用记载；荫风轮（灯笼草）首载于《植物名实图考》（1848年）芳草类，名曰大叶香薷，无药用记载。《中华人民共和国药典》2010年版一部收载的断血流即为上述两种原植物。临床可用于治疗各种崩漏、尿血、鼻衄、牙龈出血、创伤出血、子宫肌瘤出血。本文从断血流提取物（断血流片等制剂的原料）中分离得到18个单体化合物，经IR，UV，MS，NMR等波谱学数据分析并结合化合物的理化性质鉴定出了其中15个化合物，它们分别是蒙花苷（化合物A）、洋芹素-7-芸香糖苷（化合物B）、柚皮素（化合物C）、洋芹素（化合物D）、高圣草素（化合物E）、木樨草苷（化合物F）、柚皮素-7-芸香糖苷（化合物G）、香蜂草苷（化合物H）、Clinopodiside II（化合物I）、Clinoposaponin Ga（化合物J）、Buddlejasaponin IV b（化合物K）、3β，16β，24-醛基，23,28-四羟基-9，12（13）-二烯-齐墩果烷-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基（1→2）]-[β-D-吡喃葡萄糖基（1→3）]-β-D-吡喃呋糖苷（化合物L）、3β，16β，11-酮基，23，28-四羟基-12（13）-烯-齐墩果烷-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基（1→2）]-[β-D-吡喃葡萄糖基（1→3）]-β-D-吡喃呋糖苷（化合物M）、3β，16β，16-乙酰基，23，28-四羟基-11，13（18）-二烯-齐墩果烷-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基（1→2）]-[β-D-吡喃葡萄糖基（1→3）]-β-D-吡喃呋糖苷（化合物N）、5-甲基-8（3-甲氧基-4-羟基苯基）-5，7-二烯辛酸（化合物O）。其中化合物L、M、N、O为新化合物。本文还对断血流提取物（片）中五环三萜类皂苷成分-Clinopoliside II，buddlejasaponin IVb的反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）含量测定方法进行了相关研究。1化学成分的分离及结构鉴定1.1分离取断血流提取物5kg，进行大孔吸附树脂D101柱层析，用水-乙醇梯度洗脱（水、15%乙醇、70%乙醇、90%乙醇）。70%乙醇洗脱部位进行聚酰胺柱层析，洗脱次序乙醇-水（水、15%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇）梯度洗脱。对聚酰胺柱30%乙醇洗脱部位进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇-冰乙酸梯度洗脱得12个组分；其中第七组分用水饱和的正丁醇溶解，再用浓度为0.01mol/L的NaOH溶液萃取。0.01mol/l的NaOH层用浓HCl调节pH为2左右，再用水饱和的正丁醇萃取得两部位，即正丁醇层和碱液层，正丁醇层为皂苷部位，碱液层为黄酮部位。皂苷部位经Sephadex LH-20柱层析，再经制备液相纯化得到化合物I-O，黄酮部位经聚酰胺柱层析，再经制备液相纯化得到化合物A-H。1.2结构鉴定通过理化性质鉴定和IR，UV，MS，NMR等波谱分析并与参考文献对照，确定化合物A为蒙花苷、化合物B为洋芹素-7-芸香糖苷、化合物C为柚皮素、化合物D为洋芹素、化合物E为高圣草素、化合物F为木樨草苷、化合物G为柚皮素-7-芸香糖苷、化合物H为香蜂草苷、化合物I为Clinopodiside II、化合物J为Clinoposaponin Ga、化合物K为醉鱼草皂苷IVb（Buddlejasaponin IVb）、化合物L为3β，16β，24-醛基，23,28-四羟基-9,12（13）-二烯-齐墩果烷-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基（1→2）]-[β-D-吡喃葡萄糖基（1→3）]-β-D-吡喃呋糖苷、化合物M为3β，16β，11-酮基，23,28-四羟基-12（13）-烯-齐墩果烷-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基（1→2）]-[β-D-吡喃葡萄糖基（1→3）]-β-D-吡喃呋糖苷、化合物N为3β，16β，16-乙酰基，23,28-四羟基-11,13（18）-二烯-齐墩果烷-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基（1→2）]-[β-D-吡喃葡萄糖基（1→3）]-β-D-吡喃呋糖苷、化合物O为5-甲基-8（3-甲氧基-4-羟基苯基）-5，7-二烯辛酸。2断血流提取物（片）中Clinopoliside II、buddlejasaponin IVb的含量测定2.1色谱及检测器条件色谱条件：AichromaBond-AQ C18（4.6×250mm5μm），流动相为甲醇-水（78:22），流速1.0mL·min-1，柱温30℃。检测器条件：雾化温度27.0℃，漂移管温度60.0℃，载气压力30psi，增益值设置20。2.2方法学考察I标准曲线的绘制buddlejasaponin IVb线性回归方程为：lg S=1.506lg m+4.469，相关系数：r=0.9980。结果表明，buddlejasaponin IVb对照品在0.496μg～9.92μg范围内线性关系良好；其Clinopoliside II线性回归方程为：lg S=1.460lg m+4.602，相关系数：r=0.9970。结果表明，Clinopoliside II对照品在0.200μg～20.0μg范围内线性关系良好。II精密度考察Clinopoliside II、buddlejasaponin IVb峰面积的日内精密度分别为2.26%、2.40%；日间精密度分别为3.98%、4.45%。日内保留时间精密度分别为0.53%、0.69%；日间保留时间精密度分别为0.69%、0.49%。III重复性考察6份供试品溶液中Clinopoliside II、buddlejasaponin IVb的含量的RSD为4.48%、3.39%，表明该方法的重复性良好。IV稳定性考察精密吸取同一供试品溶液（1号样品），分别于配制后0、2、4、8、12、24小时进样，Clinopoliside II、buddlejasaponin IVb的峰面积的RSD为3.38%、2.42%，可见化合物Clinopoliside II、buddlejasaponin IVb在24小时内稳定，配制好的供试品溶液可以在24小时内测定。V加样回收率考察Clinopoliside II、buddlejasaponin IVb的平均加样回收率为99.7%、97.7%，RSD分别为1.16%、1.46%，该结果说明Clinopoliside II、buddlejasaponin IVb的平均加样回收率良好。方法学实验表明，该含量测定方法具有较高的准确度、灵敏度、精密度和选择性。含量测定结果表明，断血流提取物中Clinopoliside II、buddlejasaponin IVb的平均含量分别为0.35%、0.98%；将断血流提取物折算成断血流片（0.3g提取物/片），则每片含Clinopoliside II、buddlejasaponin IVb分别为1.05mg、2.94mg。本实验深入研究了断血流提取物（片）中的化学成分，发现并鉴定了四个新的化合物，是近十年来风轮菜属与断血流药材有效成分研究的最新进展，具有很大的学术意义与应用价值。建立了主要成分-Clinopoliside II、buddlejasaponin IVb的含量测定方法，其研究结果可为断血流制剂建立多指标性成分质量标准提供科学依据，进而完善断血流制剂的质量评价体系；同时也为断血流开发并利用新的药用价值提供科学依据。

全文目录


中文摘要  8-11
ABSTRACT  11-16
英文缩略词表  16-17
前言  17-18
第一章 绪论  18-26
  1.1 资源分布  18
  1.2 植物学特征  18-19
  1.3 化学成分  19-21
    1.3.1 黄酮类化合物  19
    1.3.2 皂苷类化合物  19-20
    1.3.3 挥发油类  20
    1.3.4 萜类  20
    1.3.5 苯丙素类  20-21
    1.3.6 芳香族类  21
    1.3.7 其他  21
  1.4 主要药理作用  21-25
    1.4.1 抑制中枢神经系统，镇静、催眠、止痛和抗惊厥作用  21-22
    1.4.2 抗炎  22
    1.4.3 抗菌活性  22-23
    1.4.4 细胞毒性和抗肿瘤活性  23-24
    1.4.5 抗氧化活性  24
    1.4.6 对心血管系统的作用  24
    1.4.7 降血糖作用  24-25
    1.4.8 抗辐射作用  25
    1.4.9 其他  25
  1.5 主要临床应用  25
  1.6 研究目的  25-26
第二章 断血流提取物的化学成分的研究  26-52
  2.1 原料与仪器  26-27
    2.1.1 实验原料  26
    2.1.2 实验仪器  26-27
    2.1.3 试剂及材料  27
  2.2 安徽特色中药断血流提取物活性成分预实验  27-28
  2.3 D_(101)大孔吸附树脂吸附量的考察  28
  2.4 柱层析流程图  28-29
  2.5 断血流提取物化学成分结构鉴定  29-50
    2.5.1 化合物 A 的结构分析  29-30
    2.5.2 化合物 B 的结构解析  30-32
    2.5.3 化合物 C 的结构解析  32-33
    2.5.4 化合物 D 的结构解析  33-34
    2.5.5 化合物 E 的结构解析  34-35
    2.5.6 化合物 F 的结构解析  35-36
    2.5.7 化合物 G 的结构解析  36-38
    2.5.8 化合物 H 的结构解析  38-40
    2.5.9 化合物 I 的结构解析  40-41
    2.5.10 化合物 J 的结构解析  41-42
    2.5.11 化合物 K 的结构解析  42-43
    2.5.12 化合物 L 的结构解析  43-44
    2.5.13 化合物 M 的结构解析  44-45
    2.5.14 化合物 N 的结构解析  45-46
    2.5.15 化合物 O 的结构解析  46-50
  2.6 酸水解 TLC 检验方法  50
  2.7 结构鉴定数据  50-52
第三章 断血流提取物（片）中醉鱼草苷Ⅳb，Clinopodiside II 的HPLC-ELSD 含量测定  52-60
  3.1 实验仪器、试剂和对照品  52
  3.2 方法学考察  52-59
    3.2.1 色谱色析条件  52
    3.2.2 流动相的选择  52-53
    3.2.3 供试品溶液的制备  53-54
    3.2.4 线性关系的考察  54-55
    3.2.5 精密度考察  55-57
      3.2.5.1 峰面积精密度考察  55-56
      3.2.5.2 保留时间精密度  56-57
    3.2.6 重复性考察  57-58
    3.2.7 稳定性考察  58
    3.2.8 加样回收率考察  58-59
  3.3 含量测定  59-60
第四章 结果与讨论  60-61
参考文献  61-65
综述  65-85
  参考文献  81-85
附图  85-111
个人简历  111-112
硕士期间发表论文  112-113
致谢  113

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学 > 化学分析与鉴定
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