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不同分子量银耳寡糖的制备及其活性研究

作　者: 贾艳秋
导　师: 高其品
学　校: 长春中医药大学
专　业: 药物化学
关键词: 银耳寡糖 PMP衍生化 MTT LC-MS GC-MS
分类号: TQ461
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：制备不同分子量片段的银耳寡糖，对其进行理化性质和化学结构研究，并考察不同分子量的银耳寡糖对HK-2细胞的影响。方法：本实验采用酸水解、水解产物以醇沉法制备多糖和寡糖的混合物，混合物通过透析进行分离和通过717强碱型阴离子交换树脂和732强酸型阳离子交换树脂混合柱除盐，得到寡糖部分（TO-1）。通过糖含量测定（苯酚-硫酸法）、酸性糖含量测定（间羟基联苯法）、蛋白质含量测定（BCA试剂盒法）和PMP柱前衍生化，对其理化性质和单糖组成进行了分析；采用葡聚糖凝胶G-15色谱柱对TO-1进行分离，以HPLC方法对分离结果进行检测，得到了不同分子量的两个部分，分别对这两个部分进行理化性质测定和单糖组成分析；并考察了不同分子量片段的银耳寡糖对HK-2细胞的影响；采用LC-MS连用技术分析样品TO-1，分析其中寡糖的组成；同时对TO-1进行衍生化，制备成部分甲基化部分乙酰化的糖醇衍生物，通过GC-MS分析了其糖苷键的连接方式。结果：三种不同分子量银耳寡糖的理化性质为：TO-1的中性糖含量约为33.99%，酸性糖含量约为7.05%，蛋白含量约为10.5%；TO-1-1的中性糖含量约为91.54%，酸性糖含量约为15.95%，蛋白含量约为10.91%；TO-1-2的中性糖含量约为45.04%，酸性糖含量约为5.39%，蛋白含量约为11.87%。HPLC法分析结果表明，三种不同分子量片段的银耳寡糖均由Man、Glu和GlcA组成；通过LC-MS分析可知，样品TO-1是由2到9个糖残基组成的寡糖混合物；GC-MS结果表明, TO-1主要以1→3连接的Man为主，存在少量的1→6和1→2连接，分子量较大的寡糖以1→3连接的Man为主链，在其2位具有由Man构成的侧链，末端主要是由Glu和Man构成，TO-1中葡萄糖醛酸为非还原末端。不同分子量的银耳寡糖对HK-2细胞均有促进增殖作用，并且随着时间的延长，增殖作用越显著，分子量范围在230-1700D的银耳寡糖对HK-2细胞增殖作用没有差异。结论：采用酸水解、醇沉法对银耳部分酸水解产物进行制备,经过分离纯化得到银耳寡糖，通过LC-MS和GC-MS初步分析了银耳寡糖的化学结构，并通过MTT法检测不同分子量的银耳寡糖对HK-2细胞的影响，对寡糖的研究具有重要意义。

全文目录


中文摘要  7-8
ABSTRACT  8-10
英文缩略语  10-11
前言  11-12
文献综述  12-18
  第一章 寡糖的研究进展  12-16
    1 寡糖的概念和分类  12
    2 寡糖的提取  12-13
    3 寡糖的分离  13-14
    4 寡糖的检测  14-15
    5 寡糖的生物学功能  15-16
  第二章 银耳的研究进展  16-18
    1 概述  16
    2 药理作用研究  16-18
实验研究  18-48
  第一章 银耳子实体的酸水解和糖部分的制备  18-21
    材料与方法  18-19
      1 试剂与仪器  18
      2 实验方法  18-19
    结果与讨论  19-21
  第二章 样品 TP-4 的分离纯化  21-27
    材料与方法  21-24
      1 试剂与仪器  21
      2 实验方法  21-24
    结果与讨论  24-26
    结论  26-27
  第三章 银耳寡糖 TO-1 的分离  27-30
    第一节 HPLC 法分析银耳寡糖 TO-1  27-28
      材料与方法  27
        1 试剂与仪器  27
        2 实验方法  27
      结果与讨论  27-28
    第二节 葡聚糖凝胶 G-15 色谱柱分离银耳寡糖 TO-1  28-29
      材料与方法  28
        1 试剂与仪器  28
        2 实验方法  28
      结果与讨论  28-29
    结论  29-30
  第四章 不同分子量银耳寡糖对 HK-2 细胞的影响  30-32
    材料与方法  30-31
      1 试剂与仪器  30
      2 实验方法  30-31
    结果与讨论  31-32
  第五章 银耳寡糖 TO-1 的 LC-MS 分析  32-45
    材料与方法  32
      1 试剂与仪器  32
      2 实验方法  32
    结果  32-44
    讨论  44-45
  第六章 银耳寡糖 TO-1 的糖苷键连接方式研究  45-48
    材料与方法  45-46
      1 试剂与仪器  45
      2 实验方法  45-46
    结果与讨论  46-47
    结论  47-48
结语  48-49
致谢  49-50
参考文献  50-53
附图  53-59

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中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 制药化学工业 > 中草药制剂的生产
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