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若尔盖高原土壤芽孢杆菌遗传多样性研究及三株苏云金芽孢杆菌的特性分析

作　者: 马健华
导　师: 陈强
学　校: 四川农业大学
专　业: 土壤学
关键词: 芽孢杆菌遗传多样性苏云金芽孢杆菌 Cry基因杀虫活性
分类号: S476.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

从四川若尔盖高原37份土样中分离获得78株芽孢杆菌,采用ERIC-PCR、16S rDNA PCR-RFLP、16S rRNA基因全序列分析等技术,研究了供试芽孢杆菌的遗传多样性,初步确定了其系统发育及分类地位。从中筛选出三株苏云金芽孢杆菌,对其Cry基因扩增,并测定了其生物学特性和毒性,其结果如下：(1)采用ERIC-PCR技术,对72株芽孢杆菌进行了遗传多样性分析,结果表明,供试菌株呈现了丰富带型,菌株间存在有较大的遗传差异。聚类分析中,供试菌株在81%相似性水平处分为8个遗传群。(2)根据ERIC-PCR分析结果,选取了57株进行16S rDNA PCR-RFLP聚类分析,其图谱在89%水平上分为7个遗传群,16S rDNA PCR-RFLP图谱分析和ERIC-PCR图谱分析结果较一致。进而,对19株代表菌株16SrDNA全序列进行测定,构建了系统发育树状。结果表明,19个代表菌株分布于芽孢杆菌属(Bacillus)、短芽孢杆菌属(Brevibacillus)、类芽孢杆菌属(Paneibacillus)三个系统发育分支,包括短小芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌等。(3)从供试芽孢杆菌筛选获得了3株苏云金芽孢杆菌YB12,YB14和YB19,分离率为3.85%,其伴孢晶体有菱形和球形。对3株Bt菌株的Cry基因进行扩增的结果表明,供试菌株都含有Cryl基因；生物学特性研究表明,供试Bt的最适生长温度15-20℃,最适初始pH为7和8；毒力测试表明,三株菌对蚕的杀虫活性分别为：73.81%、66.67%和54.76%,杀虫活性较高。

若尔盖高原土壤芽孢杆菌遗传多样性研究及三株苏云金芽孢杆菌的特性分析

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