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白头翁总皂苷碱水解产物的抗肿瘤作用及机制研究

作　者: 季秀美
导　师: 杨世林; 刘艳丽
学　校: 苏州大学
专　业: 药物化学
关键词: 白头翁总皂苷碱水解产物 抗肿瘤 细胞凋亡 PI3K/AKT/mTOR信号通路
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：前期工作提示白头翁总皂苷具有明显的体内外抗肿瘤作用，其碱水解产物体外抗肿瘤作用优于白头翁总皂苷。本论文将系统探讨白头翁总皂苷碱水解产物（PAHS）的抗肿瘤作用及其可能的机制。方法：采用HPLC-ELSD法对PAHS中8种含量较高的皂苷进行测定；采用MTT及集落形成实验检测白头翁总皂苷碱水解产物对人肝癌SMMC-7721以及人肺癌A549的增殖抑制作用，同时采用Giemsa染色观察PAHS对肿瘤细胞形态的改变；在体内，建立小鼠肉瘤S180、小鼠肝癌H22、C57小鼠Lewis肺癌模型，取荷瘤小鼠血液进行血液检查并对小鼠肿瘤组织进行病理检查；在机制方面，采用hoechest33342染色观察SMMC-7721凋亡细胞形态变化；通过流式细胞仪检测PAHS对7721及A549细胞凋亡及周期的影响；采用western blot法检测线粒体通路和PI3K通路内重要信号分子的表达。结果：HPLC结果表明，白头翁总皂苷碱水解产物中8种皂苷单体（白头翁皂苷D、常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷、白头翁皂苷、hederacolchiside A1、白头翁皂苷F、齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷、齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉）含量的总和超过85%； MTT及集落形成实验表明PAHS (0.80-25.00μg/ml)可以时间和剂量依赖性的抑制SMMC-7721及A549细胞的增殖，抑制7721细胞集落的形成；体内试验表明白头翁总皂苷碱水解产物(50，100，200mg/kg)可以抑制小鼠肉瘤，小鼠肝癌及肺癌的生长且具有剂量依赖性，在给药剂量200mg/kg时三种模型的抑制率分别达到49.8%、43.7%、70.6%，HE染色表明PAHS组(50，100，200mg/kg)小鼠肿瘤组织均有大面积坏死及凋亡细胞的出现。电镜切片检查发现，荷肝癌小鼠及荷Lewis肺癌小鼠肿瘤组织均出现染色质集聚成团、边集等明显细胞凋亡特征;与CTX组相比，PAHS处理组小鼠的脾系数、胸腺系数均有提高，提示PAHS的免疫抑制作用较小。机制研究表明，PAHS (6.25，12.50，25.00μg/ml)可以诱导SMMC-7721及A549细胞凋亡，同时可以将SMMC-7721细胞周期阻滞在S期，将A549细胞生长阻滞在G0/G1期。western blot实验结果表明白头翁总皂苷碱水解产物可以上调Cyt-C， CleavedCaspase-3，Bax等蛋白的表达，同时下调PI3Kp85、p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K等相关蛋白的表达。结论：白头翁总皂苷碱水解产物具有抗肺癌和肝癌的作用，其机制可能与调节PI3K/AKT/mTOR信号通路引起的细胞凋亡有关。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-10
引言  10-17
第一部分 HPLC-ELSD 法测定白头翁水解总皂苷中 8 种皂苷的含量  17-26
  1、仪器与试剂  17
  2、样品的制备  17-18
  3、试验方法与结果  18-24
    3.1 色谱条件  18
    3.2 系统适用性试验  18
    3.3 系统重现性试验  18-19
    3.4 对照品溶液的制备  19
    3.5 供试品溶液的制备  19
    3.6 线性关系考查  19-20
    3.7 精密度实验  20-21
    3.8 重现性实验  21
    3.9 稳定性实验  21-22
    3.10 回收率实验  22-23
    3.11 含量测定实验  23-24
  4、讨论  24-26
第二部分 白头翁总皂苷碱水解产物的药效学研究  26-42
  1. 实验材料与方法  26-31
    1.1 实验材料  26-28
    1.2 实验方法  28-31
  2、实验结果  31-41
    2.1 PAHS 对 SMMC-7721 及 A549 的增殖抑制作用  31-32
    2.2 PAHS 对人肺癌细胞 A549 的增殖抑制作用  32-33
    2.3 PAHS 对小鼠体内移植瘤的影响  33-41
  3、小结  41-42
第三部分 白头翁总皂苷碱水解产物的抗肿瘤作用机制  42-55
  1. 试验方法和材料  42-54
    1.1 实验材料  42-43
    1.2 实验方法  43-46
    1.3 实验结果  46-54
  2、小结  54-55
讨论  55-60
结论  60-61
参考文献  61-68
附录  68-69
致谢  69-70

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学 > 实验药理学
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