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阿里红三萜酸类化合物抗肿瘤作用及分子机制研究

作　者: 张慧锋
导　师: 刘珂
学　校: 吉林大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 阿里红 三萜酸 抗肿瘤 细胞凋亡 分子机制
分类号: R285
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


本论文首先对阿里红三萜酸类化合物(Triterpene acids)的超声提取工艺进行了研究。阿里红三萜酸最佳提取工艺为超声功率245.2W、提取时间34.3min、提取温度50.0℃。进一步利用硅胶柱层析分离纯化阿里红三萜酸类化合物，最终得到的样品阿里红三萜酸含量高达74.14%，是纯化前的5.13倍。采用用高效液相-质谱联用技术对阿里红三萜酸类化合物纯化后的产物进行结构分析，确定其中三萜酸类化合物包括：去氢硫色多孔菌酸，3-酮基-去氢硫色多孔菌酸，Fomitopsins C，阿里红酸F，阿里红酸G，去氢齿孔酸，去氢齿孔酮酸。体外实验是通过MTT法，将不同浓度的药物作用于A549细胞、U937细胞、Hela细胞和HepG2细胞后，检测结果经过线性回归，确定了阿里红三萜酸对四种细胞的增殖抑制半效应量IC50为：A54929.91μg/mL，U93771.51μg/mL，Hela56.87μg/mL，HepG242.98μg/mL；选择对药物较为敏感的人肺腺癌A549细胞株，Hoechst333258染色后，置荧光显微镜下观察细胞形态的变化，发现细胞呈现凋亡的形态；不同浓度阿里红三萜酸作用于A549细胞后，采用AnnexinⅤ-FITC&PI双染并利用FCM检测细胞凋亡情况，药物可以诱导A549细胞凋亡，早期凋亡率与晚期凋亡率均高于对照组(P<0.05)。本实验还探讨了阿里红三萜酸类化合物诱导A549细胞发生凋亡的机制。阿里红三萜酸诱导A549凋亡的机制是一方面通过降低Bcl-2蛋白的表达，增加Bax蛋白的表达，从而促进MPTP孔开放，降低△Ψm；另一方面通过升高ROS水平，ROS水平的升高可以诱导MPTP孔开放，使△Ψm降低。△Ψm的降低将导致线粒体膜内相对高渗，内部基质膨胀，外膜破裂，释放出Cyto C。Cyto C释放入胞浆后，激活Caspase级联反应，最终导致Caspase-3的活化并诱导细胞凋亡。阿里红三萜酸类化合物抗肿瘤作用的体内实验研究是作用于S180荷瘤小鼠，结果发现，阿里红三萜酸在小鼠体内具有较好的抑制S180肿瘤细胞生长的作用，说明阿里红三萜酸体内抗肿瘤作用良好。

全文目录


内容提要  4-5
中文摘要  5-7
Abstract  7-15
第1章 绪论  15-35
  1.1 前言  15
  1.2 阿里红国内外研究的现状  15-25
    1.2.1 阿里红的资源分布及植物形态  15-17
    1.2.2 阿里红主要化学成分  17-22
    1.2.3 阿里红药理学研究  22-24
    1.2.4 阿里红的临床应用  24-25
  1.3 三萜酸类化合物的研究  25-32
    1.3.1 三萜酸类化合物的抗肿瘤活性  25-29
    1.3.2 三萜类化合物的抗肿瘤作用机制  29-32
  1.4 本研究的目的、意义，主要研究内容和创新点  32-35
    1.4.1 研究的目的意义  32-33
    1.4.2 主要研究内容  33
    1.4.3 创新点  33-35
第2章 阿里红三萜酸的提取分离纯化及结构鉴定  35-61
  第一节 阿里红三萜酸的提取工艺研究  35-49
    1.1 实验材料  36
    1.2 实验方法  36-39
    1.3 结果分析  39-48
    1.4 讨论  48-49
  第二节 阿里红三萜酸纯化及结构鉴定  49-59
    2.1 实验材料  49-50
      2.1.1 药物  49-50
      2.1.2 试剂  50
      2.1.3 仪器  50
    2.2 实验方法  50-52
    2.3 实验结果  52-59
  第三节 本章小结  59-61
第3章 阿里红三萜酸体外抗肿瘤作用研究  61-87
  第一节 阿里红三萜酸对多种肿瘤细胞生长抑制作用研究  61-68
    1.1 实验材料  61-62
    1.2 实验方法  62-64
    1.3 实验结果  64-67
    1.4 讨论  67-68
  第二节 阿里红三萜酸诱导人肺腺癌 A549 细胞凋亡作用研究  68-86
    2.1 实验材料  68-71
    2.2 实验方法  71-75
    2.3 实验结果  75-83
    2.4 讨论  83-86
  第三节 本章小结  86-87
第4章 阿里红三萜酸体内抗肿瘤作用研究  87-93
  4.1 实验材料  87-88
    4.1.1 动物  87
    4.1.2 细胞株  87
    4.1.3 药物  87
    4.1.4 试剂  87-88
    4.1.5 仪器  88
    4.1.6 溶液的配制  88
  4.2 实验方法  88-89
    4.2.1 动物模型的建立  88-89
    4.2.2 分组并给药  89
    4.2.3 数据统计分析  89
  4.3 实验结果  89-91
    4.3.1 阿里红三萜酸对 S180荷瘤小鼠瘤块平均重量、体积及抑瘤率的影响  89-90
    4.3.2 阿里红三萜酸对 S180荷瘤小鼠体重的影响  90-91
  4.4 讨论  91-93
第5章 结论  93-95
  5.1 阿里红三萜酸的分离、提取与结构鉴定  93
  5.2 阿里红三萜酸体外抗肿瘤作用研究  93
  5.3 阿里红三萜酸体内抗肿瘤作用研究  93
  5.4 有待进一步研究的问题  93-95
参考文献  95-104
攻读博士期间发表的学术论文  104-105
致谢  105

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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