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“Cocktail”探针药物法评价丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒体细胞色素P450不同亚型体外代谢活性的影响

作　者: 刘洁
导　师: 娄建石
学　校: 天津医科大学
专　业: 药理学
关键词: 细胞色素P450 酶(CYP450) 大鼠肝微粒体“Cocktail”探针药物法 高效液相色谱 丹参酮ⅡA药物相互作用
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的：建立评价大鼠肝微粒体药物代谢酶细胞色素P450(Cytochrome P450, CYP450)不同亚型CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4活性的’Cocktail"探针药物溶液的高效液相色谱检测方法；优化肝微粒体孵育条件,建立肝微粒体体外孵育体系,研究丹参酮IⅡA对大鼠肝微粒体该6种主要CYP450亚型体外代谢活性的影响,为临床合理用药提供参考。方法：选择CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4的特异性代谢底物咖啡因、美托洛尔、奥美拉唑、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和咪达唑仑制备成"Cocktail"探针溶液,建立同时测定该6种探针药物在肝微粒体中的高效液相色谱检测方法。通过优化微粒体蛋白浓度和孵育时间,建立肝微粒体体外孵育体系。研究丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒体内6种主要CYP亚型活性的影响。实验分三组进行：丹参酮ⅡA组、空白对照组和无活性组(不加大鼠肝微粒体组),每组实验平行三个样本。应用高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UV)法检测大鼠肝微粒体中丹参酮ⅡA对探针底物代谢剩余量的影响,得到酶活性百分数,以丹参酮ⅡA浓度的对数为横坐标,以酶活性百分数为纵坐标,使用GraphPad Prism5.0软件按照非线性回归,作图并计算IC50值。评价丹参酮ⅡA在大鼠肝微粒体孵育体系中对CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4体外代谢活性的影响。结果：1.本研究所建立的高效液相色谱方法,可以同时测定6种探针药物咖啡因、美托洛尔、氯唑沙宗、奥美拉唑、甲苯磺丁脲和咪达唑仑在肝微粒体中的浓度,各吸收峰分离完全,线性关系良好,准确度、精密度及稳定性均符合生物样本检测要求,操作简便。2.低浓度(0.5、1、2、4、8、16μmol·L-1)丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒CYP1A2、 CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4酶活性无显著性影响(P>0.05),而高浓度(32和96μmol·L-1)丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒CYP1A2、 CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9和CYP2E1酶活性具有抑制作用(P<0.05)。丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1的IC50值分别为32.48、34.76、26.12、26.29和26.38μmol·L-1,表示对其具有弱抑制作用。结论：1.本研究建立的大鼠肝微粒体中的’Cocktail"探针药物法操作简便,精密度、准确度、灵敏度高,检测周期短,能够同时评价药物在体外对大鼠肝微粒体6种主要CYP450亚型CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4活性的影响。2.丹参酮ⅡA在体外大鼠肝微粒孵育体系中对CYP1A2、CYP2D6、 CYP2C19、CYP2C9和CYP2E1的代谢活性具有较弱的抑制作用。临床上通常不易发生代谢性药物相互作用。

全文目录


中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
縮略语  10-11
前言  11-15
  研究现状、成果  11-14
  研究目的、方法  14-15
一、“Cocktail”探针药物的制备及HPLC方法的建立  15-31
  1 实验材料  15-16
  2 实验方法  16-19
  3 实验结果  19-30
    3.1 方法的专一性  19-21
    3.2 肝微粒体标准曲线  21-25
    3.3 肝微粒体样品的灵敏度  25-26
    3.4 精密度实验结果  26-28
    3.5 回收率实验结果  28-30
    3.6 稳定性实验结果  30
  4 小结  30-31
二、“Cocktail”探针药物法评价丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒体CYP450不同亚型体外代谢活性的影响  31-41
  1 实验材料  31-32
  2 实验方法  32-35
  3 实验结果  35-40
    3.1 不同浓度丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒体CYPs酶活性的影响  35-36
    3.2 抑制曲线及IC_(50)结果  36-40
  4 小结  40-41
讨论  41-48
结论  48-49
参考文献  49-54
发表论文和参加科研情况说明  54-55
综述  55-75
  综述参考文献  71-75
致谢  75

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学
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