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Aβ_(1-40)诱导的神经干细胞凋亡中钾通道和JNK信号转导通路的变化

作　者: 田嘉莹
导　师: 盛宝英; 齐志国
学　校: 佳木斯大学
专　业: 神经病学
关键词: AD Aβ1-40 神经干细胞 钾通道 JNK SP600125 四乙胺
分类号: R749.16
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：探讨钾通道在Aβl-40诱导的神经干细胞凋亡过程中发挥的作用；探讨JNK信号转导通路在Aβl-40诱导的神经干细胞凋亡中的作用；以及钾通道与JNK的关系。进一步了解阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）的发病机制，从而为开发治疗AD药物提供新的思路和方法。方法：1.分离提取新生的Wistar大鼠海马区的神经干细胞并传代培养，应用Nestin细胞免疫化学法鉴定。2.应用MTT法检测TEA干预Aβ1-40诱导后的神经干细胞存活率的变化。3.应用Hoechst33342染色法在荧光显微镜紫外激发下观察神经干细胞凋亡的形态学变化。4.应用比色法检测TEA对Aβ1-40诱导的神经干细胞Caspase-3活性的变化。5.应用Western blot法检测Aβ1-40诱导神经干细胞不同时间点JNK磷酸化的表达。6.应用MTT法检测SP600125干预Aβl-40诱导的神经干细胞存活率的变化。7.应用Hoechst33342染色法在荧光显微镜紫外激发下观察神经干细胞凋亡的形态学变化。8.应用比色法检测SP600125干预后Aβ1-40诱导的神经干细胞Caspase-3活性的变化。9.由于Aβl-40诱导的神经干细胞JNK磷酸化激活在24h达到高峰，故在这个时间点，孵育前30min加入TEA5mM，应用Western blot方法检测TEA对Aβl-40诱导的神经干细胞JNK磷酸化的影响。结果：1.12h内新生大鼠海马区分离的单个神经干细胞相互聚集成团状，3d后呈透亮的圆形，传代培养至第三代可见培养液中形成较大的神经球，神经干细胞标记性蛋白Nestin的表达阳性。2.1TEA对Aβ1-40诱导的神经干细胞存活率的影响，结果显示：与空白对照组相比Aβ1-40组神经干细胞存活数明显减少（p＜0.05），且随时间延长神经干细胞存活率下降。与Aβ1-40组相比Aβ1-40+TEA组神经干细胞存活率明显升高（p＜0.05）。2.2TEA对Aβ1-40诱导的神经干细胞凋亡的影响。结果显示：荧光显微镜下Aβl-40组神经干细胞48h后出现部分细胞核呈浓染的碎块状，为典型的凋亡形态学改变。与Aβl-40组相比Aβ1-40＋TEA组神经干细胞凋亡形态学变化少，凋亡率11.6%±0.4%，差异具有显著性（p＜0.01）。2.3TEA对Aβ1-40诱导的神经干细胞Caspase-3活性的影响。结果显示：与Aβl-40组相比Aβ1-40＋TEA组在各时间点均可降低Caspase-3的表达（p＜0.05），特别在24h这个时间点更为明显（p＜0.01），TEA可明显阻止Aβ1-40诱导凋亡蛋白Caspase-3的发生。3.1Aβ1-40诱导神经干细胞JNK磷酸化的表达。结果显示：在不同时间点，神经干细胞经Aβ1-405μM孵育后，JNK的磷酸化均有表达。与空白对照组相比Aβ1-40组JNK磷酸化水平随着时间的延长表达逐渐增加，在24h达到高峰，（p＜0.01）。3.2SP600125对Aβ1-40诱导的神经干细胞存活率的影响。结果显示：与Aβ1-40组相比Aβl-40＋SP600125组可明显减轻神经干细胞凋亡，且随时间的延长神经干细胞存活率逐渐升高。3.3SP600125对Aβ1-40诱导的神经干细胞凋亡的影响。结果显示：与Aβ1-40组相比Aβ1-40＋SP600125组可明显降低神经干细胞凋亡的发生，Aβ1-40＋SP600125组使凋亡发生率从20.3%±0.6%降至9.6%±1.3%（p＜0.01），而SP600125组无明显变化。3.4SP600125对Aβ1-40诱导的神经干细胞Caspase-3活性的影响。结果显示：与Aβ1-40组相比Aβ1-40＋SP600125组随着时间的延长可显著减少Caspase-3的激活；Aβ1-40组与Aβ1-40＋SP600125组相比，差异具有显著性（p＜0.01）。4.TEA对Aβ1-40诱导的神经干细胞JNK磷酸化表达的影响。结果显示：与Aβ1-40组相比Aβ1-40＋TEA组JNK磷酸化表达随时间的延长显著降低（p＜0.01）。而空白对照组和TEA组神经干细胞JNK磷酸化表达无明显改变，（p＞0.05）。结论：1.钾通道阻滞剂TEA可以明显减轻Aβ1-40诱导的神经干细胞凋亡，使神经干细胞的存活率升高，凋亡率下降。2.Aβ1-40可诱导神经干细胞发生JNK磷酸化，JNK信号转导通路参与了凋亡信号的转导，说明JNK在Aβ1-40诱导神经干细胞损伤中具有重要的作用。3.JNK特异性阻断剂SP600125可抑制Aβ1-40诱导的神经干细胞凋亡，对Aβ1-40诱导的神经干细胞毒性具有明显的保护作用。

全文目录


摘要  5-7
Abstract  7-10
前言  10-12
文献综述  12-18
材料与方法  18-27
结果  27-33
讨论  33-36
结论  36-37
参考文献  37-41
致谢  41-42
英文缩写  42-43
攻读学位期间发表的论文  43-44
附图  44-50

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 精神病学 > 脑器质性精神障碍 > 老年及早老性精神障碍
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